アメフラシ抗菌タンパク質アプリシアニンPのクローニングと抗菌作用機構の検討

海兔抗菌蛋白aplycyanin P的克隆及其抗菌作用机制研究

• 批准号: 15780142
• 负责人: 神保 充
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780142/
• 关键词: アメフラシ; 抗菌タンパク質; L-アミノ酸オキシダーゼ; ペルオキシダーゼ; 過酸化水素; 活性酸素; 紫汁

アメフラシの紫汁には抗菌・抗腫瘍タンパク質が存在するが、その作用機構は不明である。そこで、本研究では紫汁に含まれる抗菌・抗腫瘍タンパク質の作用メカニズムを明らかにすることを検討した。紫汁にカタラーゼを加えて抗菌活性を測定すると、無い場合より抗菌活性が阻害されることから、過酸化水素の産生酵素が抗菌活性に関与していることが考えられた。他のアメフラシより精製された紫汁の抗菌タンパク質としてL-アミノ酸オキシダーゼがあることから、紫汁のLAAO活性を測定したところ、塩基性アミノ酸を基質とするLAAOが存在することがわかった。次に、紫汁の抗菌作用がLAAOのみで説明できるか検討するため、精製LAAOの抗菌活性と比較した。その結果、紫汁の方がLAAO単独より抗菌活性が強いことがわかり、紫汁の抗菌作用はLAAO単独では無いと示唆された。過酸化水素を基質として抗菌作用を示す酵素としてペルオキシダーゼが知られていることから、紫汁にペルオキシダーゼが存在すると推測された。そこでペルオキシダーゼについて活性測定を行なったところ、ハロペルオキシダーゼが存在することが明らかになった。紫汁に含まれるペルオキシダーゼは遠心により沈澱し、LAAO活性と分離することから、得られた沈澱を0.05%SDSで可溶化してペルオキシダーゼ粗精製物とした。ペルオキシダーゼ粗精製物は抗菌活性を示さないが、LAAOを追加することにより、LAAOの抗菌活性を補強することがわかった。以上の結果より、紫汁の抗菌作用はLAAOおよびペルオキシダーゼにより起こっていると考えられる。

The anti-bacterial and anti-inflammatory properties of the purple extract are unknown. This study was conducted to investigate the effects of anti-bacterial and anti-tumor agents on the development of the disease. Antibacterial activity is determined in the presence of peracidifying enzymes. The activity of LAAO in purple juice was determined by the determination of its antibacterial activity and the presence of LAAO in its basic acid matrix. Next, the antibacterial activity of purple juice was compared with that of refined LAAO. As a result, the antibacterial activity of purple juice is strong, and the antibacterial effect of purple juice is weak. The presence of peracidifying hormones and their antimicrobial activity is presumed to be the cause of death. The activity of the enzyme is determined by the enzyme. The purple juice contains a precipitate that is not separated from the center, LAAO activity and separation. The resulting precipitate is soluble in 0.05% SDS and the crude extract is not refined. Antibacterial activity of the crude extract was enhanced by the addition of LAAO The above results show that the antibacterial effect of purple juice is LAAO, and the antibacterial effect of purple juice is LAAO, and the antibacterial effect of purple juice is LAAO.

项目成果

M.Jimbo, F.Nakanishi, R.Sakai, K.Muramoto, H.Kamiya: "Characterization of L-amino acid oxidase and antimicrobial activity of aplysianin A, a sea hare-derived antitumor-antimicrobial protein."Fisheries Science. 69. 1240-1246 (2003)

M.Jimbo、F.Nakanishi、R.Sakai、K.Muramoto、H.Kamiya：“L-氨基酸氧化酶的表征和海兔素 A（一种海兔衍生的抗肿瘤抗菌蛋白）的抗菌活性。”渔业科学。