ヒト好中球由来抗菌タンパク質BPIを介した大腸菌上での補体系活性化機構について

人中性粒细胞源性抗菌蛋白BPI介导的大肠杆菌补体系统激活机制

基本信息

批准号：
12780447
负责人：
西村仁
金额：
$ 0.51万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780447/
关键词：
BPI 好中球大腸菌補体系抗菌活性化 LBP

项目摘要

本年度は,以下の事項について研究を行った.(1)BPIが補体系活性化を亢進させる他の細菌の検索グラム陰性菌である大腸菌ATCC 25900株とDH5α株,およびグラム陽性菌である肺炎双球菌を用いて各種菌株上における組換えヒトBPIによる補体系活性化亢進を調べたところ,ATCC 25900株とDH5α株上ではBPIの効果が観察されたのに対して,肺炎双球菌上では補体系活性化亢進が観察されなかった.この結果より,BPIは補体系活性化亢進においてもグラム陰性菌特異的であることが示唆された.(2)補体系活性化亢進におけるBPIの機能領域の同定まずBPIのC末端領域を欠失させた変異体をHEK293細胞で産生させることを試みたが,組換えタンパク質の産生は確認できなかった.Cys-132をAlaに置換した変異体のCHO細胞における産生とその抗菌活性が報告されているので,現在,この変異体の産生を試みている.一方,グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)とBPIのC末端領域の融合タンパク質を大腸菌で産生させることに成功した.今後は,この融合タンパク質が対照のGSTと比較してBPIによる補体系活性化亢進作用に対する阻害効果をもつかどうかを検討する予定である.

今年，我们对以下事项进行了研究：（1）搜索其他细菌，以增强BPI的补体系统激活。当我们研究使用大肠杆菌25900和DH5α菌株对各种菌株的重组人BPI的增加补体系统激活时，以及革兰氏阳性细菌肺炎链球菌，它们是革兰氏阳性细菌的肺炎链球菌，我们研究了对各种菌株的重组人BPI的补体激活增加。观察到BPI对25,900菌株和DH5α菌株的影响，但在肺炎链球菌上未观察到补体系统激活。该结果表明，在增强的补体系统激活中，BPI也针对革兰氏阴性细菌具有特异性。（2）首先，在增强的补体系统激活中鉴定BPI的功能区域，我们试图在HEK293细胞中产生突变体，该突变体删除了BPI的C末端区域，但是无法确认重组蛋白的产生。由于已经报道了用Cys-132替换为ALA的CHO细胞中的突变体及其抗菌活性，因此我们目前正在尝试产生该突变体。同时，我们在谷胱甘肽S-转移酶（GST）的C末端区域成功产生了融合蛋白，在大肠杆菌中BPI。现在，我们将研究该融合蛋白是否对BPI与对照GST相比，BPI的补体系统的激活是否具有抑制作用。