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有機アニオン輸送体発現系を利用した医薬品の胆汁排泄、黄疸誘発性の種差評価系の確立

利用有机阴离子转运蛋白表达系统建立药物胆汁排泄及黄疸诱导物种差异评价体系

基本信息

批准号：
15790085
负责人：
伊藤晃成
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790085/
关键词：
Mrp2 胆汁排泄種差黄疸

项目摘要

医薬品開発過程での毒性評価はしばしばイヌやサルなどの大動物においても行われるが、ラットやマウスなどの小動物と比較してその遺伝子情報および遺伝子産物の機能に関する情報も十分ではない。毒性ターゲットとなりうる蛋白分子の機能解析は実験動物においてもなされるべきであり、これにより毒性発現の分子機構解明が加速されるはずである。また毒性ターゲット分子が既知の場合、動物実験に代替してヒト或いは動物の遺伝子を用いたin vitro発現系の利用が可能である。今年度はH15年度に引き続きマウス、サルのMrp2の機能発現系の作製と評価を行った。BALB/cマウスおよびカニクイザル肝臓cDNAよりPCRクローニングされた遺伝子はデータベースに報告されたものと比較し、いくつかのアミノ酸変異を伴うSNPsを有していた。この遺伝子産物の機能をバキュロウィルス発現系で測定した。両種のMrp2はこれまで知られているラット、ウサギ、イヌ、ヒトMrp2同様に有機アニオン性化合物の輸送活性を有することが示されたが、興味深いことに蛋白一分子当たりのグルタチオン抱合体の輸送活性、すなわち固有輸送活性がラットやイヌに比較して顕著に大きかった。またグルクロン酸抱合体に対する親和性がラットやイヌに比較して極めて低いことが明らかとなり、Mrp2分子当たりの輸送活性、基質への親和性に大きな種差があることが明らかとなった。標準抗原を用いたWestern解析より、マウスとサルの肝臓におけるMrp2蛋白発現量はラットのそれぞれ3分の1、10分の1と見積もられた。Mrp2の質的、量的違いのうち、ラット、マウス、イヌ、サルで過去に報告されていた薬物胆汁排泄能力の差は主にMrp2蛋白発現量の違いでほぼ説明可能であることが示された。一方阻害親和性に見られた大きな種差は薬物による黄疸誘発性の種差がありうることを改めて示すものであり、本研究で得られた一連のMrp2発現系はこれらを簡便にスクリーニングするツールとして応用可能と思われる。

The toxicity evaluation of the pharmaceutical product development process includes information on the function of the gene product and information on the activity of the gene product in large animals. Functional analysis of toxic molecules in animals and accelerated molecular mechanisms for toxicity development Moreover, it is possible to use toxic TA-GENT molecules in well-known situations, in the presence of animals, instead of TA-GENT, or in the presence of animal heritage in the vitro discovery system. This year's H15 annual review of Mrp2's functional development system was conducted. BALB/c The function of this protein product is determined by the reaction system. Mrp2 protein is known to have the transport activity of an organic compound, such as a protein molecule, a protein molecule, or a protein molecule. The affinity of Mrp2 to the substrate is higher than that of Mrp2 to the substrate. The standard antigen was used in Western analysis, and the expression of Mrp2 protein was 3 minutes, 10 minutes and 1 minute. Mrp2 protein production may be explained by differences in the quality and quantity of Mrp2 protein reported in the past. The results of this study show that the Mrp2 gene expression system is simple and effective.