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左右非対称性決定におけるPKD‐inv経路の解明と生体内可視化

PKD-inv 通路在确定左右不对称性中的阐明和体内可视化

基本信息

批准号：
15790109
负责人：
大橋憲太郎
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Gifu University (2004)Kyoto Prefectural University of Medicine (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790109/
关键词：
多発性嚢胞腎 PKD2 左右非対称 growth arrest cell cycle 内臓逆位多発性膿疱腎 INV PKD GFP

项目摘要

ヒトをはじめとする脊椎動物の身体は、外見上は対称であるが、内部臓器の配列・形はほとんどすべての臓器で非対称をなしている。近年、knockout/antisense等の手法を用いることによって種々の左右発生に関わる因子が報告されている。その中で、PKD2(polycystin-2)はヒト遺伝性腎疾患の原因遺伝子であり、かつ内臓逆位を起こすことが報告されている。PKD2は、transient receptor potential(TRP) receptor familyに属する6回膜貫通型cation channelで、PKD1とヘテロダイマーを形成することが知られている。そこで本研究では、mouse PKD2をcloningし、pFLAG vectorへ挿入した。さらに、その機能を検討するために、PKD1とのinteraction domain欠失、cation channel domainの一部欠失またはN末とtransmenbrane domainの欠失したpFLAG-PKD2 constructsを作製し、形態・細胞増殖およびストレス応答遺伝子発現への影響を検討した。実験は、PKD2の研究でよく使用されるHEK293細胞を用い、各constructの恒常的高発現の影響を見るためにG418によるセレクシヨンにてstable cell lineを作成した。その結果、顕微鏡下において、各stable cell lineの有意な形態的変化は観察されなかった。さらに、pFLAG-PKD2強制発現細胞と野性株のserum starvationおよび小胞体ストレスによる細胞増殖への影響をWST-1 assayを用いて検討した。しかしながら、両細胞株で細胞増殖低下およびapoptosisに対して有意な差は見られなかった。多発性嚢胞腎は、尿細管上皮細胞の異常な細胞増殖・形態変化が深く関与することが示唆されているが、今回PKD2単独の強制発現では有意な影響が観察されなかった。今後、PKD1との相互作用も含めてその細胞内シグナルの検討が必要と考えられる。

Vertebrate body, external, internal, internal In recent years, knockout/antisense techniques have been used in the production of left and right factors. PKD2 (polycystin-2) is the cause of hereditary kidney disease. PKD2, transient receptor potential(TRP) receptor family belongs to the 6-loop through cell channel, PKD1, and TRP receptor family. This study was conducted on mouse PKD2 cloning and pFLAG vector cloning. In this paper, we discuss the influence of PKD1 interaction domain, cation channel domain and pFLAG-PKD2 constructs on cell morphology, cell proliferation and cell proliferation. In the study of PKD2, HEK293 cells were used, and the effects of constant high expression of each construct were observed in G418 cells. The results, microscopic changes, and intentional changes in the shape of each stable cell line were observed. The effects of pFLAG-PKD2 stress on the proliferation of wild and wild cells were investigated by WST-1 assay. The cell line is under growth and apoptosis. Abnormality of cell proliferation and morphological changes in multiple renal and urinary tubule epithelial cells are deeply related to the occurrence of stress, and now PKD2 alone is intentionally affected. In the future, it is necessary to investigate the interaction between PKD1 and the cell.