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神経細胞死抑制への新規GRP78結合タンパク質の関与と細胞内可視化

新型 GRP78 结合蛋白参与抑制神经细胞死亡和细胞内可视化

基本信息

批准号：
17790058
负责人：
大橋憲太郎
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

我々がクローニングした新規GRP78結合タンパク質は、組織レベルでの発現解析により、脳、特に胎児および生後の神経細胞に高発現し、加齢に伴って減少することが明らかになっている。この新規GRP78結合タンパク質は、膜貫通ドメインとproline-richドメインを有するものの、既知のタンパク質との相同領域を持たないことからその機能は依然不明である。そこで本研究では、新規GRP78結合タンパク質の機能解析の一端として、Two-hybrid法を用いて新たな結合因子の探索を行った。実験は、新規GRP78結合タンパク質を全長、N末端またはC末端を解析用ベクターに組み込み、各コンストラクトとマウス脳由来のcDNA libraryを元にしたスクリーニングを行った。その結果、GABA receptor associated protein like 1、cyclophilin Aが候補遺伝子として得た。そこで、Neuro2aまたはHEK293細胞に各々の遺伝子導入を行い、両者がGRP78結合タンパク質と会合するか否かを免疫沈降法にて解析した。その結果、両候補タンパクともに、既知の結合因子GRP78と比べると新規GRP78結合タンパク質に対してほとんど結合能を有しないことが明らかになった。今後、GRP78結合タンパク質-GST融合タンパク等も用いた別のスクリーニング法によって結合因子の探索を行う予定である。また本年度は、種々の細胞系における新規GRP78結合タンパク質の発現とsiRNAによる内在性GRP78結合タンパク質ノックダウンについても検討した。その結果、siRNA処理後72時間以上にわたり新規GRP78結合タンパク質をノックダウンできる系を確立した。現在、siRNA処理ににより変動する遺伝子群をマイクロアレイ法によって解析中である。

The new regulation GRP78 combines the quality, tissue, and development analysis of fetal, fetal, and postnatal brain cells with high development, increased development, and decreased development. The new regulation GRP78 combines the quality of the film with the quality of the film. The function of the film is still unknown. In this study, the new GRP78 method was used to explore the new combination factor. The new GRP78 combines the full length and N-terminal of the protein with the cDNA library of the origin of the protein. Results, GABA receptor associated protein like 1, cyclophilin A, candidate gene In addition, Neuro2a and HEK293 cells were analyzed by immunoprecipitation method. The result is that the candidate has a known binding factor of GRP78 and a new binding factor of GRP78. In the future, GRP78 will be used to explore the binding factors in combination with GST fusion. This year, new regulations for GRP78 binding to cell lines and siRNAs were introduced to detect GRP78 binding to cell lines. Results: More than 72 days after siRNA treatment, the new GRP78 binding system was established. Now, siRNAs are processed in different ways.