哺乳類ポリコーム群複合体のリン酸化とその構造および機能への影響に関する研究

哺乳动物多梳复合物磷酸化及其结构和功能影响的研究

• 批准号: 15790144
• 负责人: 磯野 協一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research (2004)Chiba University (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790144/
• 关键词: ポリコーム; Hipk; ノックアウトマウス; マウス; リン酸化

ポリコーム群タンパク質(Eed,Ezh2,Edr2,Ring1Bなど)は標的遺伝子座上で複合体を形成しその発現を抑制する.また,多くのポリコーム群はリン酸化修飾を受けていることも知られている.しかしながら,これら分子機構はほとんど理解されていない.既に我々は酵母two-hybridスクリーニングによってEdr2結合タンパク質としてHipk1,Hipk2,Hipk3を同定していた.そこで,本年度ではHipksのポリコーム群への関与を調査した.まず,マウス11.5日胚を用いた免役共沈降法により内在性Hipksとポリコーム群との結合能を調べた.その結果,Hipks,少なくともHipk2は,Ezh2と結合していることがわかった.加えて,タグ付きHipk2およびEdr2外来遺伝子を共強発現した細胞では,弱いながらもHipk2-Edr2相互作用が見られた.次に,Ezh2とEdr2のリン酸化修飾の有無を調べた.ES細胞核抽出物を脱リン酸化酵素処理した後にウエスタン解析したところ,Edr2,Ezh2の両方でおそらく脱リン酸化効果による下方へのバンドシフトを確認することができた.Hipks欠乏によるリン酸化Ezh2,Edr2への影響を調べるためにHipk1-/-Hipk2-/-ノックアウトマウス胚由来の繊維芽細胞およびEs細胞を作製した.これら細胞のウエスタン解析の結果,期待に反して,Ezh2およびEdr2のリン酸化状態は維持されたままであった.考察すると,残ったHipk3が補正的にリン酸化しているのかもしれない.あるいは,Ezh2およびEdr2は複数のリン酸化部位を持っているためにHipk変異による非リン酸化の結果はバンドシフトとして表れないのかもしれない.

The complex formation and development of the target cluster (Eed, Ezh2, Edr2,Ring1B) are suppressed. The most important thing is that we have a lot of problems. The molecular mechanism is not understood. The yeast two-hybrid system is composed of Edr2, Hipk1,Hipk2 and Hipk3. This year, we will investigate the relationship between Hipks and their families. 11.5 days ago, the binding energy of the group was modulated by the method of free co-precipitation. The results,Hipks, Hipk2,Ezh2, are combined. The Hipk2-Edr2 interaction is observed in cells with strong and weak foreign genes. Secondly, the presence or absence of renylation modification of Ezh2 and Edr2 was regulated. Since ES cell nuclear extracts were analyzed after being treated with renylation enzymes, the formulas of Edr2 and Ezh2 can be used to confirm the effect of renylation. Due to the lack of renylation of Ezh2, Edr2 is the most important factor affecting the development of embryonic cells. As a result of this analysis,Ezh2 and Edr2 are expected to remain acidified. To investigate the residual hippk 3 in the correction of the acid in the middle of the solution. Ezh2 and Edr2 are complex acid sites, but they are not acid sites.

项目成果

Miyagishima, H: "Dissociation of mammalian Polycomb-group proteins, Ring 1β and Rue28/Phl, from the chromatin correlates with configuration changes of the chromatin in mitotic and meiotic proshise"Histochem.Cell.Biol.. 120(2). 111-119 (2003)

Miyagishima, H：“哺乳动物多梳蛋白、Ring 1β 和 Rue28/Phl 与染色质的解离与有丝分裂和减数分裂原核中染色质的构型变化相关”Histochem.Cell.Biol.. 120(2)。 119（2003）

Kaneko, T: "The mouse YAF2 gene generates two distinct transcripts and is expressed in pre-and postimplantation embryes"Gene. 315. 183-192 (2003)

Kaneko, T：“小鼠 YAF2 基因产生两个不同的转录本，并在植入前和植入后的胚胎中表达”基因。

Mammalian polycomb-mediated repression of Hox genes requires the essential spliceosomal protein Sf3b1

• DOI: 10.1101/gad.1284605
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: GENES & DEVELOPMENT
• 影响因子: 10.5
• 作者: Isono, K;Mizutani-Koseki, Y;Koseki, H
• 通讯作者: Koseki, H

Horie, A: "Generation of a monodonal antibody against the mouse Sf3bl (SAP155) gene product for U2 snRNP compenent of spliceosome"Hybrid.Hybridomics. 22・2. 117-119 (2003)

Horie，A：“针对具有剪接体的 U2 snRNP 的小鼠 Sf3bl (SAP155) 基因产物的单克隆抗体的生成”Hybrid.Hybridomics 117-119。