上皮型ナトリウムチャンネルを活性化する新規膜型セリンプロテアーゼの発見と機序解明

激活上皮钠通道的新型膜丝氨酸蛋白酶的发现和机制阐明

• 批准号: 15790154
• 负责人: 奥村 裕司
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790154/
• 关键词: 膜型セリンプロテアーゼ; 上皮型ナトリウムチャンネル

私はこれまでにラット腎臓の集合管及び腸管上皮に高発現する新規膜型セリンプロテアーゼ遺伝子(TMSP-1)の単離に成功し、リコンビナント蛋白の酵素学的性状を明らかにした。更に、本酵素がグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー型蛋白質として細胞膜上に局在し、上皮型ナトリウムチャンネルを活性化、その遺伝子発現が上皮型ナトリウムチャンネルと同じくアルドステロンによって制御されることを明らかにし、ナトリウム輸送の制御分子として重要な役割を果たすことを報告した(Okumura et al. Biol.Chem.vol.384,1483-1495,2003)。次に、昨年度に引き続き、酵素によるナトリウムチャンネル活性化のメカニズムが、チャンネル分子が酵素による限定分解を受けて活性化するのか、あるいは酵素と結合し活性化するのかという点に基づき、上皮型ナトリウムチャンネルを構成する各サブユニット遺伝子(α,β,γ)を単離、酵素の作用部位と考えられる細胞外ドメインと、TMSP-1遺伝子との共発現により、各サブユニットが限定分解を受けるか否かについて検討した。結果、αまたはγサブユニットとの共発現において、TMSP-1およびサブユニット蛋白の発現量自体には変化が認められないものの、TMSP-1の酵素活性が有意に低下したことから、両分子の結合がナトリウムチャンネル活性化に関与する可能性が示唆された。しかしながら、チャンネルの活性化はTMSP-1の活性中心に対する変異ミュータントでは認められず、TMSP-1が酵素活性を有する構造であることの重要性が示唆された。また、αおよびγサブユニットは、一部にセリンプロテアーゼインヒビターの活性中心と類似したアミノ酸配列を有しており、現在はその部位の変異ミュータントとTMSP-1との反応性を解析することで、両分子の構造上の作用部位同定を進めている。

Private は こ れ ま で に ラ ッ ト renal viscera の collection tube and high び insufflate epithelial に 発 now す る new rules membrane type セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ heritage 伝 child (TMSP - 1) の 単 に し success, リ コ ン ビ ナ ン の ト protein enzymes studied traits を Ming ら か に し た. More に, this enzyme が グ リ コ シ ル ホ ス フ ァ チ ジ ル イ ノ シ ト ー ル ア ン カ ー type protein と し て に bureau in し on cell membrane, epithelial type ナ ト リ ウ ム チ ャ ン ネ ル を activeness, そ の heritage 伝 son 発 now が epithelial type ナ ト リ ウ ム チ ャ ン ネ ル と with じ く ア ル ド ス テ ロ ン に よ っ て suppression さ れ る こ と を Ming ら か に し, ナ ト リ ウ ム conveying Youdaoplaceholder0 て て important な harvest を effect たす た とを とを report た た(Okumura et al. Biol.Chem.vol.384,1483-1495,2003). Primary に, yesterday's annual に き 続 き, enzyme に よ る ナ ト リ ウ ム チ ャ ン ネ ル activeness の メ カ ニ ズ ム が, チ ャ ン ネ ル molecular が enzyme に よ る を qualified decomposition by け て activeness す る の か, あ る い と combining し は enzyme activeness す る の か と い う に base づ き, epithelial type ナ ト リ ウ ム チ ャ ン ネ ル を constitute す る each サ ブ ユ ニ ッ ト 伝 A (alpha, beta, gamma) を 単 from, enzyme の site と test action え ら れ る extracellular ド メ イ ン と, but 伝 TMSP - 1 と の 発 now total に よ り, various サ ブ ユ ニ ッ ト が finite decomposition を by け る か no か に つ い て beg し 検 た. Results, alpha ま た は gamma サ ブ ユ ニ ッ ト と の 発 now total に お い て, TMSP - 1 お よ び サ ブ ユ ニ ッ ト protein の 発 now quantity of autologous に は variations change が recognize め ら れ な い も の の の TMSP - 1 and enzyme activity of low が intentionally に し た こ と か ら, struck molecular の combining が ナ ト リ ウ ム チ ャ ン ネ ル activeness に masato and す が る possibility in stopping さ れ た . し か し な が ら, チ ャ ン ネ ル の activeness は の TMSP - 1 active center に す seaborne る - different ミ ュ ー タ ン ト で は recognize め ら れ を ず が TMSP - 1 and enzyme activity are す る tectonic で あ る こ と の importance が in stopping さ れ た. ま た, alpha お よ び gamma サ ブ ユ ニ ッ ト は, a に セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ イ ン ヒ ビ タ ー の active center と similar し た ア ミ ノ acid with column を have し て お り, now は そ の の parts - different ミ ュ ー タ ン ト と TMSP - 1 と の anti 応 sex を parsing す る こ と で, struck molecular の の effect on structure parts with fixed を め て い る.

项目成果

Cloning and Characterization of Transmembrane-Type Serine Protease from Rat Kidney, a New Sodium Channel Activator

新型钠通道激活剂大鼠肾跨膜型丝氨酸蛋白酶的克隆和表征

• 发表时间: 2003
• 期刊: Biological Chemistry 384
• 作者: Yuushi Okumura et al.

Yuushi Okumura et al.: "Cloning and Characterization of Transmembrane-Type Serine Protease from Rat Kidney, a New Sodium Channel Activator"Biological Chemistry. 384. 1483-1495 (2003)

Yuushi Okumura 等人：“来自大鼠肾脏的跨膜型丝氨酸蛋白酶的克隆和表征，一种新的钠通道激活剂”生物化学。