C型肝炎ウイルス(HCV)複製モデルを用いたHCV増殖に伴う肝発癌機序の解明

使用丙型肝炎病毒 (HCV) 复制模型阐明与 HCV 增殖相关的肝癌机制

• 批准号: 15790350
• 负责人: 日浅 陽一
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790350/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; T7ポリメラーゼ; アデノウイルスベクター; RPA; real-time RT-PCR; PKR; Interleukin-8; phosphorylated PKR

T7 promoterの下流にC型肝炎ウイルス(HCV)全長のcDNAを持つプラスミド(pH77)をCV-1細胞あるいはHuh7細胞にトランスフェクションし、さらにT7ポリメラーゼを発現する組換えアデノウイルス(Ad-T7)を感染させることによりHCV遺伝子を宿主細胞に発現させHCV replication systemを開発した。感染後HCV negative鎖およびHCVコア蛋白は、real-time RT-PCRあるいはWestern Blottingにて9日まで持続的に検出可能でありHCV replicationが確認された。さらに、T7 polymeraseを持続発現する細胞株(Huh-T7)を用いてアデノウイルスを用いないHCV replication systemを樹立し得た。この系においてもHCV negative鎖とHCVコア蛋白の発現持続をみた。これらの系を用いてHCV増殖とそれに関連するPKR, Interleukin-8(IL-8)について発癌への寄与の有無を検討した。PKRは癌抑制蛋白として報告されているが、これらの系ではHCV発現によりPKRの発現は全ての細胞株で増加した。またPKR活性化の指標であるphosphorylated PKRの増加、phosphorylated eIF2α/total eIF2α比の増加がみられた。HCV E2蛋白・NS5A蛋白を介したPKR抑制作用はこの系においては明らかではなかった。C型肝硬変患者の癌部・非癌部を用いた検討でも、肝細胞癌部では非癌部に比べてPKR発現量の増加、phosphorylated eIF2α/total eIF2α比の増加を伴うPKR活性化がみられた。このことより、PKRはC型肝炎において癌抑制蛋白としてよりもむしろ癌促進因子として働いている可能性が示唆された。PKRと同様にHCV replicationに関わることが報告されているInterleukin-8(IL-8)についてはHCV発現によりmRNAおよび上清中への産生増加がみられた。今後増加したIL-8がHCV増殖、発癌を促進するかについてはさらに検討する必要があると思われる。

The full-length cDNA of hepatitis C virus (HCV) downstream of T7 promoter was detected at pH77 in CV-1 cells and Hu7 cells, and the HCV replication system was developed in host cells infected with Ad-T7. HCV replication was confirmed by real-time RT-PCR and Western Blotting. The HCV replication system was established in a cell line (Huh-T7) that was successfully developed with T7 polymerase. This is the key to HCV negative protein production. This is a study of the relationship between HCV proliferation and PKR, Interleukin-8(IL-8), and cancer development. PKR protein expression was reported to increase in HCV production in various cell lines. PKR activation indicators were increased by phosphorylated PKR and phosphorylated eIF2 α/total eIF2 α ratio. HCV E2 protein and NS5A protein mediate PKR inhibition In patients with type C cirrhosis, PKR production increased in cancerous and non-cancerous regions, and the ratio of phosphorylated eIF2 α to total eIF2 α increased in hepatocellular carcinoma regions, accompanied by PKR activity. The possibility that PKR may be involved in the treatment of hepatitis C may be demonstrated by the presence of tumor suppressor protein and tumor promoter. PKR and HCV replication are related to the increase in HCV mRNA and supernatant production. In the future, IL-8 will promote HCV proliferation and cancer development.

项目成果

CCR5 promotor polymorphism influences the interferon response of patients with chronic hepatitis C in Japan.

CCR5 启动子多态性影响日本慢性丙型肝炎患者的干扰素反应。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Intervirology 47
• 作者: Konishi I;Horiike N;Hiasa;Y;Michitaka K;Onji M.
• 通讯作者: Onji M.

Hiasa Y, Kamegaya Y, Nuriya H, Onji M, Kohara M, Schmidt EV, Chung RT.: "Protein kinase R is increased and is functional in hepatitis C virus-related hepatocellular carcinoma."American Journal of Gastroenterology. 98. 2528-2534 (2003)

Hiasa Y、Kamegaya Y、Nuriya H、Onji M、Kohara M、Schmidt EV、Chung RT.：“蛋白激酶 R 增加，并且在丙型肝炎病毒相关肝细胞癌中发挥作用。”美国胃肠病学杂志。

Hepatitis C virus acts as a tumor accelerator by blocking apoptosis in a mouse model of hepatocarcinogenesis

• DOI: 10.1002/hep.20621
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: HEPATOLOGY
• 影响因子: 13.5
• 作者: Kamegaya, Y;Hiasa, Y;Chung, RT
• 通讯作者: Chung, RT

Major histocompatibility complex class‐I presentation impaired in transgenic mice expressing hepatitis C virus structural proteins during dendritic cell maturation

在树突状细胞成熟过程中表达丙型肝炎病毒结构蛋白的转基因小鼠中主要组织相容性复合体 I 类表达受损

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Medical Virology
• 影响因子: 12.7
• 作者: Y. Hiasa;Hidemi Takahashi;Masumi Shimizu;H. Nuriya;K. Tsukiyama;Takeshi Tanaka;N. Horiike;M. Onji;M. Kohara
• 通讯作者: M. Kohara

In vivo immunization by vaccine therapy following virus suppression by lamivudine: a novel approach for treating patients with chronic hepatitis B

• DOI: 10.1016/j.jcv.2004.07.004
• 发表时间: 2005-02-01
• 期刊: JOURNAL OF CLINICAL VIROLOGY
• 影响因子: 8.8
• 作者: Horiike, N;Akbar, SMF;Onji, M
• 通讯作者: Onji, M