大腸粘膜上皮細胞に発現するNox1オキシダーゼを介した大腸粘膜固有の自然免疫応答

结肠粘膜上皮细胞表达的 Nox1 氧化酶​​介导的结肠粘膜特异性先天免疫反应

• 批准号: 15790370
• 负责人: 中野 陽子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima Jogakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790370/
• 关键词: Nox1オキシダーゼ; 大腸粘膜上皮細胞; 自然免疫応答; 活性酸素; TLR

1.大腸粘膜細胞に発現するNox1 oxidaseの酵素本体と細胞質成分の同定実験には、モルモット初代培養大腸粘膜上皮細胞とヒト大腸がん細胞株(Coco2,T84)を用いた。モルモット大腸粘膜細胞には、Nox1、NADPHオキシダーゼの構成因子であるp22-phox,p67-phox,rac1、さらに新規構成因子p41-nox,p51-noxが発現していること、同細胞は,目発的に多量のO_2^-を産生することを明らかにした。一方、ヒト大腸がん細胞株は、p67-phox,p41-noxを発現しておらず、ほとんどO_2^-を産生していなかった。そこで、これらの細胞にそれぞれの因子の遺伝子を導入し、Nox1オキシダーゼの再構成実験を行った結果、p41-noxを過剰発現させることで、O_2^-産生能を獲得することを見いだした。2.大腸粘膜上皮細胞に発現するTLRファミリーと自然免疫応答を誘発する菌体リガンドの同定これまでの研究で、大腸粘膜上皮細胞、ヒト大腸がん細胞株には、TLR2,TLR4,TLR5が発現していること、同細胞は、TLR5のリガンド、サルモネラ菌のflagellinに反応し多量のO_2^-を産生するが、ペブチドグリカン(TLR2リガンド)、LPS(TLR4リガンド)には反応しないことを明らかにしている。今回、大腸がん細胞株T84細胞を用いて、flagellin-TLR5経路によるO_2^-産生機構を明らかにするため、flagellinによるTLR5シグナルを解析した。その結果、flagellinは、TAK1 (transforming growth factor-b-activated kinase 1)とTAK1結合タンパク質1をリン酸化し、Nox1の発現を誘導することで、T84細胞にO_2^-産生の増大を誘導していることを見いだした。

1. Nox1 oxidase expression in colorectal mucosa cells and the identification of cytoplasmic components were studied in primary cultured colorectal mucosa epithelial cells and colorectal cell lines (Coco2,T84). P22-phox,p67-phox, rac1 and p41-nox were found in large intestine mucosa cells, and O_2-was found in large amounts in the same cells. A large intestine cell line, p67-phox,p41-nox, was produced. In addition, the gene expression of p41-Nox gene was introduced into the cell, and the gene expression of p41-nox gene was obtained. 2. Study on Expression of TLR and Induction of Natural Immune Response in Colorectal Mucosa Epithelial Cells and Colorectal Cell Lines TLR2,TLR4,TLR5 in Colorectal Mucosa Epithelial Cells and Colorectal Cell Lines (TLR2 release), LPS(TLR4 release), and so on. Now, the T84 cell line is used in the analysis of the flagellin-TLR5 pathway. The results showed that flagellin, TAK1 (transforming growth factor-b-activated kinase 1) and TAK1 combined with NOX1 induced the production of NOX1, and O_2^-production in T84 cells was induced.