大腸粘膜上皮細胞に発現するNox1オキシダーゼを介した大腸粘膜固有の自然免疫応答

结肠粘膜上皮细胞表达的 Nox1 氧化酶​​介导的结肠粘膜特异性先天免疫反应

• 批准号: 15790370
• 负责人: 中野 陽子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima Jogakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790370/
• 关键词: Nox1オキシダーゼ; 大腸粘膜上皮細胞; 自然免疫応答; 活性酸素; TLR

1.大腸粘膜細胞に発現するNox1 oxidaseの酵素本体と細胞質成分の同定実験には、モルモット初代培養大腸粘膜上皮細胞とヒト大腸がん細胞株(Coco2,T84)を用いた。モルモット大腸粘膜細胞には、Nox1、NADPHオキシダーゼの構成因子であるp22-phox,p67-phox,rac1、さらに新規構成因子p41-nox,p51-noxが発現していること、同細胞は,目発的に多量のO_2^-を産生することを明らかにした。一方、ヒト大腸がん細胞株は、p67-phox,p41-noxを発現しておらず、ほとんどO_2^-を産生していなかった。そこで、これらの細胞にそれぞれの因子の遺伝子を導入し、Nox1オキシダーゼの再構成実験を行った結果、p41-noxを過剰発現させることで、O_2^-産生能を獲得することを見いだした。2.大腸粘膜上皮細胞に発現するTLRファミリーと自然免疫応答を誘発する菌体リガンドの同定これまでの研究で、大腸粘膜上皮細胞、ヒト大腸がん細胞株には、TLR2,TLR4,TLR5が発現していること、同細胞は、TLR5のリガンド、サルモネラ菌のflagellinに反応し多量のO_2^-を産生するが、ペブチドグリカン(TLR2リガンド)、LPS(TLR4リガンド)には反応しないことを明らかにしている。今回、大腸がん細胞株T84細胞を用いて、flagellin-TLR5経路によるO_2^-産生機構を明らかにするため、flagellinによるTLR5シグナルを解析した。その結果、flagellinは、TAK1 (transforming growth factor-b-activated kinase 1)とTAK1結合タンパク質1をリン酸化し、Nox1の発現を誘導することで、T84細胞にO_2^-産生の増大を誘導していることを見いだした。

1。对于在结肠粘膜细胞中表达的NOX1氧化酶的酶体和细胞质成分的实验，我们使用了原代培养的豚鼠结肠粘膜上皮细胞和人类结肠癌细胞系（可可2，T84）。据透露，NOX1，P22-PHOX，P67-PHOX，RAC1，NADPH氧化酶的成分因子以及新颖的成分因子p41-Nox和p51-Nox在豚鼠猪结肠粘膜粘膜细胞中表达，并且细胞产生了大量O_2^ - 。另一方面，人类结肠癌细胞系未表达p67-phox，p41-nox，几乎没有O_2^ - 。因此，将每个因子的基因引入这些细胞中，并进行了实验以重建NOX1氧化酶，并且发现过表达P41-Nox导致产生O_2^ - 的能力。 2。在结肠粘膜上皮细胞和诱导先天免疫反应的细菌配体中表达的TLR家族的鉴定，先前的研究表明，TLR2，TLR4和TLR5在结肠粘膜上皮细胞和人类结肠癌细胞中表达，对TLR5 Ligants，dobants，do ligants，do fragillian响应，但对pebands，pebands and vlighillian响应，但Glycans（TLR2配体）或LPS（TLR4配体）。在本文中，我们通过鞭毛蛋白分析了TLR5信号，以使用结肠癌细胞系T84细胞来阐明鞭毛蛋白-TLR5途径的O_2^ - 产生机理。结果，我们发现鞭毛蛋白磷酸化tak1（转化生长因子-B激活的激酶1）和tak1结合蛋白1诱导NOX1表达，从而诱导T84细胞中的O_2^ - 产生增加。