新規中間径フィラメント・デスマスリンに結合する因子の探索

寻找与新型中间丝去马林素结合的因子

• 批准号: 15790446
• 负责人: 水島 和幸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790446/
• 关键词: desmuslin; yeast two hybrid法; 筋細胞; dystrophin; yeast two-hybrid

desmuslinは、α-dystrobrevin-1をbaitとして行ったtwo-hybrid法で獲得された中間径フィラメントで、免疫沈降法ではdesminに結合するという特性を持つ。そこで本研究では、desmuslinに結合する因子の探索を行い、desmuslinの機能を解析することで筋細胞の構造および筋収縮機構の解明に近づくことを目的とし、Yeast Two Hybrid法を用いて網羅的にdesmuslinに結合する蛋白質の探索を行った.ヒト筋cDNAライブラリーからdesmuslinの全長cDNAをPCRで増幅しbaitベクターを構築した.さらに結合部位の検討のために全長cDNAの5'側,3'側を増幅したcDNAおよびヒトリンパ球DNAより増幅したdesmuslin遺伝子をベクターに組み込んだ.desmuslinの全長cDNAをbaitとして用い、ヒト筋cDNAライブラリーからdesmuslinに結合する因子をスクリーニングした結果では、α-dystrobrevin-1とdesminをdesmulinに結合する蛋白質として得ることはできたが、新規に結合する因子は現時点では得られていない.また多くの非特異的結合蛋白質が得られ、結合部位を限定したbaitの作製が必要と考えられた.さらにイントロンを含むdesmuslin遺伝子のヒト筋cDNAおよびヒト脳cDNAスクリーニングは現在進行中である.さらに今回desmuslinに対する抗体を作製し、骨格筋細胞における局在を検討した.その結果ヒト骨格筋の細胞膜上と細胞内での染色と、電子顕微鏡でZ帯に沿った存在を確認した.共焦点顕微鏡による観察では、contamereに強い染色性を認め、desmuslinはcostamereや神経筋・筋腱接合部等の筋収縮においてストレスのかかる部位により強く発現しており、筋収縮機構において重要な役割を持つと考えられた.

The characteristics of desmuslin and α-dystrobrevin-1 bait were obtained by two-hybrid method and immunoprecipitation method combined with desmin. In the course of this study, desmuslin combined with factor analysis, desmuslin was used to analyze the mechanism of muscle cell analysis, and Yeast Two Hybrid was used to explore the purpose of this study. The desmuslin of the Internet was used to explore the protein profile. The whole length of the desmuslin, the cDNA, the PCR, the bait, the steel, the steel. The whole length of the joint of the two parts is cDNA 5'. 3's full-length cDNA

项目成果

b-Synemin localizes to regions of high stress in human skeletal myofibers.

b-Synemin 定位于人类骨骼肌纤维的高应力区域。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Muscle&Nerve 30.3
• 作者: Yuji Mizuno