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ノックアウトマウスを用いた血小板活性化の細胞内刺激伝達経路の解明

使用基因敲除小鼠阐明血小板激活的细胞内刺激传递途径

基本信息

批准号：
15790503
负责人：
渡邊直英
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790503/
关键词：
PI3K p85α Btk Tec PLCγ2 GP VI ITAM ノックアウトマウス細胞内刺激伝達

项目摘要

クラスIAのPI3Kの主要な活性調節サブユニットであるp85α欠損血小板では、クラスIA全体のキナーゼ活性は正常血小板の5%にまで低下しており、コラーゲン以外の血小板活性化物質に対する反応は正常であったが、コラーゲン受容体GP VIを介した機能は、凝集、脱顆粒、フィブリノゲンへの結合、粘着のいずれの反応も正常血小板と比べ著しく低下していた。そして、この機能低下は下流分子であるBtk、Tec、PLCγ2のリン酸化の低下が原因である事を示し、Blood誌に発表した。(Blood 2003;102:541-548.)次にクラスIAのPI3Kの下流で働くBtkの欠損血小板の機能を検討し、p85α欠損血小板と同様GP VIを介した反応のみに機能低下を示す事を明かとした。また、血小板には、Btkと同様の蛋白構造を持つTecキナーゼが存在するので、Btk/Tec二重欠損マウスを作成しその血小板機能を検討した。ここでは各々の単一欠損より二重欠損血小板の方がGP VIを介した反応は低下し、それはPLCγ2のリン酸化の低下が原因である事を発見したが、これは英国のグループに先に発表された。ここでBtkもTecもそのPHドメインを介してPI3Kの産物であるPIP3に結合する事で細胞膜直下に移動し働く蛋白であるので、p85α欠損はBtk、Tec二重欠損と同様の機能障害を示すと考えられるが、実際にはp85α欠損よりもBtk欠損血小板の機能障害の程度は強かった。また、p85α/Btk二重欠損マウスを作成し、血小板機能を検討した所、各々の単一欠損血小板よりもGP VIを介した反応は著しく低下する事が確認されたので、Btkが、PI3Kだけでなく、他の経路からも刺激伝達を受けている可能性が示唆された。さらにBtkが細胞膜直下に移動する為のアダプター蛋白を共免疫沈降法にて同定し、投稿準備中である。

The main activity regulator of PI3K in CRIA is p85α, which is deficient in platelets. The activity of all CRIA is lower than 5% of normal platelets. Platelet-activating substances other than CRIA are normal. The receptor GP VI mediates functions such as aggregation, degranulation, and binding of CRIA. Adhesion and anti-platelet activity are lower than normal platelet activity. Btk, Tec and PLCγ2 are the reasons for the decrease of their functions. (Blood 2003;102:541-548.) The function of deficient platelets in Btk and the function of deficient platelets in GP VI are discussed in detail below. Platelet function is discussed in the presence of Btk/Tec double defect in the protein structure of platelet. The reason for the decrease in the number of PLCs is that the number of PLCs is lower than that of PLCs, which is higher than that of PLCs. Btk and Tec are deficient in the function of platelet. The degree of functional impairment of Btk and Tec is higher than that of p85 α deficiency. In addition, the formation of p85α/Btk double impairment, platelet function, platelet GP VI, and other single impairment factors confirmed the possibility of other pathway stimulation. In the meantime, Btk is moving down the cell membrane in order to prepare for the simultaneous determination of protein by immunosedimentation and submission.