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ダウン症発症における21番染色体q22.2領域ヒトSIM2遺伝子の関与

染色体21q22.2区域的人类SIM2基因参与唐氏综合症的发生

基本信息

批准号：
15790557
负责人：
八巻明子
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1,転写調節因子SIM2の標的遺伝子を同定するためにDifferential Display法を用い,HAS2,HLCS, IGF2R, LOX, PRPF39などの候補遺伝子を見いだした。SIM2単独またはSIM2とヘテロ2量体を形成するARNT2との共強制発現細胞を用い、これらの候補遺伝子についてreal-time PCR法で遺伝子発現量解析を行った。HAS2とHLCSにおいてSIM2およびSIM2-ARNT2強制発現細胞で遺伝子発現量の低下が見られ、HAS2とHLCS遺伝子がSIM2により抑制されると予測された。今後はこれら標的遺伝子がSIM2により直接発現調節される事・HAS2,HLCS遺伝子のpromoter領域の解析およびSIM2-ARNT複合体結合部位の検索を行う。2,マウス胎仔を用いたin vivoプロモーターアッセイを目指し、ヒトSIM2プロモーター領域約2.2kbを組み込んだトランスジェニックマウスを作製した。発現は胎生8.0日目において上部腸管で見られ始め、耳胞および手肢先端へと発現部位が変化した。胎生10.5日目で耳胞発現は消失し、手肢先端は胎生14.5日目以降で消失した。今後は様々なSIM2プロモーター領域を組み込んだトランスジェニックマウスを作製し、発現パターンを詳細に解析する。3,SIM2,ARNTおよびARNT2タンパクはbHLH-PASファミリーに属し、HLHドメイン、2個のPASドメイン(PAS1とPAS2)を介して2量体を形成すると推定されている。今回我々は、SIM2タンパクのARNTおよびARNT2とのヘテロ2量体形成ドメインを同定するためにFLAGタグ化したSIM2とHAタグ化したARNTおよびARNT2の完全長あるいは種々の変異体を用い、HEK293細胞に一過性に共発現後、免疫沈降法を行った。SIM2-ARNTの2量体化ドメインはPAS1とPAS2ドメインが必要であったが,SIM2-ARNT2複合体ではPAS2ドメインのみで結合でき、SIM2-ARNTおよびSIM2-ARNT2の2量体ドメインは異なっていた。

1, HAS2,HLCS, IGF2R, LOX, PRPF39, write, write, IGF2R, LOX, PRPF39, write, write, read, write, write, SIM2 is used alone. SIM2 is used to make 2-volume measurements. ARNT2 is co-strengthened to detect cell usage, and real-time PCR method is used to analyze the volume of the cell. HAS2, HLCS, SIM2, SIM2-ARNT2, SIM2-ARNT2, cell, cell, In the future, we will find out the problem directly in the SIM2 field of the SIM2-ARNT complex. We will analyze the SIM2-ARNT complex in the field of promoter. 2, the baby will be treated with the help of the in vivo, the SIM2, the eyes, and the 2.2kb. On the 8.0 day after birth, the upper part of the tube, the ear cell, the tip of the hand and limb, and the location of the upper part of the fetus were found. The ear cells of the eyes of 10.5 days of birth "disappeared", and the tip of the hand and limbs "14.5 days of birth" disappeared. In the future, we need to know if there is a problem in the field of SIM2, so that we can analyze the situation. 3Get SIM2, which was introduced by ARNT