肝幹細胞を用いた肝再生構築に関する基礎的研究

利用肝干细胞进行肝再生的基础研究

• 批准号: 15790734
• 负责人: 有泉 俊一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790734/
• 关键词: 肝幹細胞; 再生医療; 肝再生; ES細胞; 混合型重複肝癌

肝再生医療の開発を目指して、肝臓内に局在する肝幹細胞を採取して培養し、肝再生構築を試みた。ラット、マウス、ヒト肝臓組織を採取して酵素処理にて単細胞化し、抗CD34抗体を1次抗体としてビーズ結合2次抗体を利用したpositive selectionを行い、採取された細胞のin vitroでの培養を試みたが、いずれの場合もCD34陽性細胞のpositive selectionが困難であり、また採取した細胞の培養でも細胞増殖が認められなかった。細胞培養にコラーゲンゲルやHGFを用いた場合でも同様に細胞培養が困難であった。最近の報告ではCD29、CD49f、c-Metの抗体利用の可能性が示されたが、それらによるpositive selection及びin vitro cultureには成功していない。以上の結果より、肝幹細胞以外の細胞ソースとしてES細胞、骨髄細胞からの肝細胞分化誘導と肝再生構築を新たに検討した。ES細胞としてマウス129sv ES細胞株を用い、STOをfeeder cellとしてまずLIF含有DMEM培養液にて129sv ES細胞を培養後、LIFを除いてHGFを加えた培養液にて培養し、肝細胞への分化誘導を試みた。また、マウス大腿骨より骨髄細胞を採取し、同様にHGFを添加した培養液にて培養し、肝細胞への分化誘導を検討した。肝細胞への分化誘導は、アルブミンの産生で検討した。HGFにて培養後のES細胞ではわずかに抗アルブミン抗体で染色される細胞が認められたが、骨髄細胞では明らかではなかった。肝細胞への分化誘導判定のため、AFPとG6PのmRNA発現をRT-PCRで解析を進めている。今回の研究でES細胞から肝細胞が分化誘導される可能性が示唆されたが、培養条件としてHGFのみでは不十分と考えられ、さらに別のgrowth factorの追加やホルモンの併用の検討をさらに進めている。

The clinical practice of liver regeneration medicine was conducted, and the liver tissue culture and liver regeneration tests were performed by the Bureau of Hepatic Regeneration. The tissue samples were collected from the tissues of human liver, liver, The cells were cultured in the same way as in the same cell culture. The cell culture was difficult. Recently, CD29, CD49f, c-Met antibodies have been reported successfully using the possibility to show that positive selection and in vitro culture antibodies are successful. The results of the above results showed that the differentiation of ES cells and bone cells led to the development of liver regeneration. After ES cell culture, 129sv ES cell culture, STO feeder cell cell culture, LIF containing DMEM culture solution, 129sv ES cell culture, LIF cell culture, HGF culture, liver cell differentiation and cell differentiation. The thigh bone and bone cells were harvested, the culture liquid was added to HGF, and the differentiation of liver cells was used to guide the culture. The cells of the liver were induced to differentiate and differentiate from each other. After HGF culture, ES cells were stained with anti-tumor antibodies, bone cells and bone cells. The differentiation of liver cells was determined by Elisa, and the RT-PCR analysis was performed by AFPG G6P mRNA. This time, we have studied the possibility of ES cell differentiation and differentiation of liver cells. We have indicated that the conditions for HGF cell differentiation are not very good, and that we should use additional information to improve the performance of growth factor.