転移性前立腺癌に対する、IL‐12およびB7‐1遺伝子発現抗腫瘍ワクチンの検討

表达 IL-12 和 B7-1 基因的转移性前列腺癌抗肿瘤疫苗的检查

• 批准号: 15790861
• 负责人: 村本 将俊
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790861/
• 关键词: 抗腫瘍ワクチン; IL-12; B7; 前立腺癌; 国際研究者交流; 米国

1.In vitro studyまずin vitroにおいて、ベクターの持つdirect cytotoxicityの評価と、あわせてIL-I2secretionの定量を行った。178-2BMAマウス前立腺癌細胞を24-wellプレートで培養し、種々のMOIでベクターをトランスフェクションさせたのち、その細胞数の変化を経時的にカウントして、細胞毒性を評価した。その結果、200MOIまではdirect cytotoxicityを認めない結果であった。また同時に培養液の上澄みも回収し、ELISA法を用いてIL-12の産生量を定量し(BioSource International,Camarillo,CA)、至適MOIの検索をおこなった。その結果、100MOI以上においては、IL-12の産生量に明らかな差を認めず、同MOIが至適であると考えられた。次に遺伝子導入癌細胞ワクチンにおける腫瘍表面抗原発現の同定として、フローサイトメトリー解析によって、それぞれ、遺伝子未導入群、コントロールベクター(Ad/CMV/β-gal)導入群、IL-12遺伝子導入群、IL-12+B7-1遺伝子導入群での細胞表面抗原の発現の比較を行った。その項目としてMHCclassI,classII,B7-1(CD80),B7-2(CD86)(Phar Mingen,San Diego,CA,USA)の発現について、それぞれの検討を行った。2.In vivo studyIn vitroで同定された至適ウイルス濃度(100MOI)を用いて、178-2BMA細胞にIL-12,およびIL-12+B7-1遺伝子を導入したのち、24時間後に同細胞に対して100Gyの放射線照射を当てたものを腫瘍細胞ワクチンとして用いて、検討を行っている。治療群はコントロールであるHBSS群、コントロールベクターAd/CMV/β-gal)導入群、IL-12遺伝子導入群、IL-12+B7-1遺伝子導入群の計4群とし、一回のワクチン接種細胞数は1.0x10^6/100μlとして設定した。また最終的な結論は得られていないが、IL-12,およびIL-12+B7-1遺伝子導入群の双方において、局所腫瘍重量、ならびに肺転移数について、有意な抗腫瘍効果を認めており、そのCTL誘導も含めた機序の解析を行っている。

1.In vitro study, in vitro, IL-I2secretion, direct cytotoxicity, IL-I2secretion, and so on. 2BMA cells 24-well adenocarcinoma cell culture, MOI cell culture, cell count reduction and cytopathic acid test. The results, the 200MOI results, the direct cytotoxicity results, the results. At the same time, the culture solution was added to the solution, and the ELISA method was used to determine the quantity of biomass by IL-12 (BioSource International,Camarillo,CA), until the MOI solution was used. The results of the test, the results of the 100MOI and above, the growth rate of the IL-12 system, and the results of the test are the same as those of MOI. The tumor cells were subintroduced into the tumor cells and the surface antigens of the tumor cells were detected. The results showed that the cell surface antigens of the cancer cells were identical, the tumor cells were not in the group, the tumor cells were not in the group, the Ad/CMV/ β-gal was introduced into the group, the IL-12+B7-1 gene was introduced into the group, and the cell surface antigen was detected in the cell surface antigen group. The item MHCclassI,classII,B7-1 (CD80), B7-2 (CD86) (Phar Mingen,San Diego,CA,USA) shows that you are not working, and that you are not doing anything. 2.In vivo studyIn vitro uses the same temperature to the temperature temperature (100MOI) to determine the temperature of the IL-12, the temperature of IL-12+B7-1 is in the cell, and the radiation line of the 100Gy is irradiated in the same cell at 24: 00. when the temperature is low, the cell temperature is low and the temperature is low. The number of cells in one cycle is 1.0x10 ^ 6

项目成果

佐藤 威文 他: "In situ gene therapy for prostate cancer."Current Gene Therapy.. (in press).

Takefum​​i Sato 等人：“前列腺癌的原位基因治疗。”当前基因治疗..（正在印刷中）。