レーザーキャプチャー・ダイセクションとPCRによる側頭骨組織からの難聴遺伝子解析

使用激光捕获解剖和 PCR 对颞骨组织进行耳聋基因分析

• 批准号: 15790924
• 负责人: 古宇田 寛子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790924/
• 关键词: レーザーキャプチャーマイクロダイセクション; TaqMan PCR; 遺伝子解析; 内耳組織; ミトコンドリア遺伝子異常; MELAS; レーザーキャプチャー・マイクロダイセクション

レーザーキャプチャー・マイクロダイセクションとTaqMan PCRを用いて、遺伝性感音難聴をきたす疾患であるMELASの側頭骨組織から難聴遺伝子解析を行っている。MELASはミトコンドリアDNA3243変異に起因する母系遺伝の疾患で神経症状、筋症状とともに感音難聴をきたす。その側頭骨組織の病理学的所見としては、血管条の萎縮とラセン神経節細胞の減少が特徴的であった。しかしそれらから抽出したミトコンドリアDNA3243の変異率は必ずしも組織学的所見と一致するものではなく、個々の細胞レベルでの検討も必要であると考えられた。今回我々は、これまでにMELAS内耳の蝸牛有毛細胞、血管条、ラセン神経節細胞などの各組織からLaser Capture Micro Dissection(LCM)により窒素レーザーで細胞を取り出し、そこからDNAを抽出した。さらにそれをミトコンドリアDNA3243をターゲットとしてTaqMan PCRを用いて増幅し、そこから各組織の変異率を同定することを試みた。その結果、内耳各組織におけるミトコンドリアDNA3243の変異率は、有毛細胞1.25%,血管条0.68%,ラセン神経節43.97%,球形嚢38.68%,卵形嚢9.60%,顔面神経2.79%,聴神経27.2%であった。これらの結果は血管条以外の組織では比較的病理学的所見と一致するものであったが、血管条においては相応しないものであった。また値の一定性についてもまだ安定はみられず、これまでの報告との相違も含めて、今後も検討を重ねていく予定である。本年度はさらにミトコンドリア遺伝子7511の異常により非症候性感音難聴をきたした側頭骨標本についても同様の解析を行っており、現在検討中である。

The analysis of DNA in MELAS lateral skull tissue was carried out using TaqMan PCR. MELAS has a unique DNA3243 for maternal disorders, neurological symptoms, and sensory disorders. The pathological findings of the lateral skull tissue were characterized by atrophy of vascular strips and reduction of ganglion cells. The difference in DNA3243 was found to be consistent with histological findings and was necessary for further investigation. MELAS inner ear snails have hair cells, vascular strips, and ganglion cells. Laser Capture Micro Dissection(LCM) is used to extract DNA from these cells. The DNA3243 gene was used to amplify the DNA sequence and to determine the rate of variation among tissues. The results showed that the variation rate of DNA3243 was 1.25% in hairy cells, 0.68% in vascular strips, 43.97% in nerve nodes, 38.68% in spherical neurons, 9.60% in oval neurons, 2.79% in facial neurons and 27.2% in cerebral neurons. The results are consistent with pathological findings other than vascular strips. For example, if you want to change your mind, you can change your mind. This year, we are investigating the abnormal behavior of 7511 non-symptomatic sex sounds.

项目成果

Katsumasa Takahashi, MD, Saumil Merchant, MD, Hiroko Koda et al.: "Temporal Bone Histpathological and quantitative Analysis of Mitochondrial DNA in MELAS"The Laryngoscope. 113・8. 1362-1368 (2003)

Katsumasa Takahashi, MD, Saumil Merchant, MD, Hiroko Koda 等：“MELAS 中线粒体 DNA 的颞骨组织病理学和定量分析”喉镜 113・8 (2003)。