レーザーキャプチャー・ダイセクションを用いた内耳感覚細胞のアールエヌエー解析

使用激光捕获解剖对内耳感觉细胞进行 RNA 分析

基本信息

  • 批准号:
    18791194
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.14万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2006 至 2008
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

内耳は感覚細胞である有毛細胞、エネルギー産生を担う血管条、ラセン神経節などを含み、高度に分化した細胞の集合体である。難聴の病態を分子学的に解明するために、個々の細胞からDNA,RNAを抽出・解析することを目的としている。すでにホルマリン固定セロイジン包埋ヒト側頭骨標本からは、レーザーキャプチャーマイクロダイゼクションを用いてヒト内耳を構成する細胞を分別採取し、抽出したDNAをTaqMan PCRで解析することで、細胞レベルにおけるDNA解析の手法を取得している。より不安定なRNAに関しては、昨年の報告で、ヒト凍結標本から膜迷路を採取してそこからRNAを抽出し、TaqMan PCRを用いて組織レベルでの解析を行なう手法を開発した。さらにヒト内耳凍結標本を用いて細胞レベルでの解析を行なうために、レーザーキャプチャーマイクロダイゼクションとTaqMan PCRを組み合わせて解析する手法を安定させるべく、再度ホルマリン固定セロイジン包埋ヒト側頭骨標本を用いて手技の安定性の検討を行なった。対象はMELAS症例2例の側頭骨標本とした。MELASはミトコンドリア病の1型で難聴を高率に合併するが、その臨床症状、難聴の程度は症例により異なる。側頭骨病理所見では、血管条とラセン神経節の変性が主な所見と考えられ、1例については先の検討で、病理組織学的所見と細胞レベルでのDNAの変異度が比較的一致するとの結果を得た。さらに1例のホルマリン固定セロイジン包埋標本について、細胞レベルでのDNA変異率の解析を行なっている。
Sense of inner ear は 覚 cells で あ る are hair cells, エ ネ ル ギ ー article を bear う vessels, ラ セ ン god 経 section な ど を み, highly に differentiation し の た cells aggregate で あ る. Difficult 聴 の of pathological molecular を に interpret す る た め に, a 々 の cells か ら DNA, RNA を extraction, parsing す る こ と を purpose と し て い る. す で に ホ ル マ リ ン fixed セ ロ イ ジ ン embedding ヒ ト lateral skull specimen か ら は, レ ー ザ ー キ ャ プ チ ャ ー マ イ ク ロ ダ イ ゼ ク シ ョ ン を with い て ヒ ト inner ear を constitute す る cells を し were taken respectively, drew し た DNA を TaqMan PCRで analysis する とで とで and cell レベ における におけるDNA analysis を techniques を obtain て て る る る る る. よ り unrest な RNA に masato し て は, yesterday years の reports で, ヒ ト frozen specimen か ら membranous labyrinth を take し て そ こ か ら RNA を out し, TaqMan PCR を い て organization レ ベ ル で の parsing line を な う gimmick を open 発 し た. さ ら に ヒ を ト inner ear frozen specimen with い て cells レ ベ ル で の parsing line を な う た め に, レ ー ザ ー キ ャ プ チ ャ ー マ イ ク ロ ダ イ ゼ ク シ ョ ン と TaqMan PCR を group み close わ せ て parsing す る gimmick を settle さ せ る べ く, again ホ ル マ リ ン fixed セ ロ イ ジ ン embedding ヒ ト を lateral skull specimen with い て manipulation の stability の 検 line for を な っ た. For two cases of <s:1> MELAS syndrome, the skull specimens on the affected side were と treated with た. MELAS は ミ ト コ ン ド リ の ア disease type 1 で difficult 聴 を high rate に merger す る が, そ の clinical symptoms, difficult 聴 の degree cases は に よ り different な る. Lateral skull pathological seen で は article, vascular と ラ セ ン god 経 section の と exam - sex が な Lord see え ら れ, 1 case of に つ い て は の first beg で 検, pathological histology seen と cells レ ベ ル で の の DNA - thin が more consistent す る と た を の results. さ ら に 1 case の ホ ル マ リ ン fixed セ ロ イ ジ ン embedding specimen に つ い て, cell レ ベ ル で の DNA - different rate の parsing line を な っ て い る.

项目成果

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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
細胞レベルのmtDNA遺伝子変異の定量解析.内耳病態の解明と展開.
细胞水平上 mtDNA 基因突变的定量分析。内耳病理学的阐明和发展。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    M Sano;K Kaga;K Mima;佐野真幸 加我君孝 伊藤憲治 美馬和男 井野賢司 官振傑;山本 宇紘;高橋紀成;須長 寛;古宇田寛子;古宇田寛子;古宇田寛子
  • 通讯作者:
    古宇田寛子
内耳細胞のmtDNA変異量は病理変化と相関するかー2例のMELAS側頭骨標本の検討
内耳细胞 mtDNA 突变量与两份 MELAS 颞骨标本的病理变化相关吗?
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    M Sano;K Kaga;K Mima;佐野真幸 加我君孝 伊藤憲治 美馬和男 井野賢司 官振傑;山本 宇紘;高橋紀成;須長 寛;古宇田寛子
  • 通讯作者:
    古宇田寛子
MELASの側頭骨病理.内耳病態の解明と展開.
MELAS 颞骨病理学的阐明和发展。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    M Sano;K Kaga;K Mima;佐野真幸 加我君孝 伊藤憲治 美馬和男 井野賢司 官振傑;山本 宇紘;高橋紀成;須長 寛;古宇田寛子;古宇田寛子
  • 通讯作者:
    古宇田寛子
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    2003
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    $ 2.14万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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    2002
  • 资助金额:
    $ 2.14万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
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