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幹細胞系の網膜神経節細胞への分化誘導、およびその過程の分子生物学的解析

干细胞分化为视网膜神经节细胞的诱导及该过程的分子生物学分析

基本信息

批准号：
15790991
负责人：
金本尚志
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790991/
关键词：
鶏胚プロテオミクス網膜眼内への遺伝子注入網膜神経節細胞 PEDF

项目摘要

分化過程にある鶏胚の網膜組織から得られたサンプルを用いて、プロテオミクスおよびマススペストロメトリーを行い、differential display法にて生着細胞の神経分化に重要な役割を果たしている推察されるタンパク(標的タンパク)を同定することに成功した。標的タンパクとしては、約15個が挙げられたが、転写因子、細胞骨格成分、アポトーシス誘導因子、発生分化誘導因子と多種多様の機能を有するタンパクが見出されると同時に、機能未知の新規タンパクも見出された。鶏胚網膜組織の免疫染色においては、標的タンパク群の多くは、数種類の網膜細胞において選択的に発現していることが分かった。また、ウェスタンブロット法ににより、プロテオミクス解析の再現性が一部の標的タンパクにおいて、確認された。次に、網膜分化に対する標的タンパク群の機能解析のために、まずは、ラット網膜神経前駆細胞を準備し、市販されている遺伝子導入試薬を用いた標的タンパク強制過剰発現を行った。一部の標的タンパクは細胞死を抑制し、また、神経突起伸長を促進する標的タンパクも認めた。それらの標的タンパク群の生体レベルでの機能解析を行うことを目的として、鶏胚の眼内への遺伝子注入、すなわちマイクロシリンジを用いたDNAの硝子体内への注入を行った。遺伝子導入試薬としてin vivo jetPEI (Polyplus社製)を使用し、注入したGFP遺伝子の発現を、網膜組織レベルで確認した。つまり、従来より行われているエレクトロポレーション法やウィルスベクター法より、簡便で、臨床応用を期待できるシステム構築の糸口を見つけ出すことに成功した。

The differentiation process of embryonic retina tissue was successfully performed by differential display method, which was used to predict the differentiation of embryonic retina tissue. About 15 target genes were found, including transcription factors, cell skeleton components, apolisis-inducing factors, differentiation inducing factors and a variety of functions. At the same time, new genes with unknown functions were found. Immunostaining of embryonic retina tissue showed that there were many kinds of retinal cells in the retina. Reproducibility of the analysis of a part of the target is determined by the method. In addition, the function analysis of the target group of retinal differentiation and differentiation was carried out in the preparation of retinal neurons and the introduction of gene into the market. A part of the target is to inhibit cell death, promote neuronal elongation, and promote cell death. The function analysis of the target group in vivo is carried out for the purpose of injecting DNA into the eye. Gene transfer assay in vivo jetPEI (Polyplus) was used, injected, and GFP gene development was confirmed in retina tissue. For example, if you want to build a website, you can use it to create a website that is easy to use.