網膜における細胞の生死と分化に関わるWNTシグナル伝達系の探求

探索参与视网膜细胞生命、死亡和分化的WNT信号转导系统

• 批准号: 18791280
• 负责人: 金本 尚志
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791280/
• 关键词: Wnt9; 網膜; 細胞死; Wnt-9

前年度(H18年)の研究結果より、培養系の網膜未分化細胞であるR28細胞を用いたin vitroの実験系において、Wnt-9はグルタミン酸神経毒性などによる神経細胞死に対して、神経保護の作用を有し、それはcaspase-3の活性化の抑制を介していることが判明していた。Wntファミリーは共通してペプチド・シークエンスを有しており、基本的に分泌タンパクである。そのため、Wnt9/14の細胞外分泌後の行方を検討することを目的として、C末端HA-tagged Wnt9、ペプチド・シークエンスを削除したC末端HA-tagged Wnt9DN、それとHA-tagged controlvcctorを、293細胞に遣伝子導入した。24時間後に細胞を溶解し、全細胞溶解液をSDAG-PAGEした。ウェスタン・ブロットし、anti-HA antibodyを用いて、HA-tagged proteinを描出した。その結果、ペプチド・シークエンスが切断されそ細胞外に放出されたであろう活性型Wnt9/14は、再び再取り込みされている可能性が示唆された。さらに、Wnt9/14のタンパク機能をさらに詳しく解析するために、Wnt9/14の結合タンパクを同定する目的にて、HA-tagged Wnt9/14とHA-taggedcontro vectorを293細胞に過剰発現させ、抗HA抗体を用いて免疫沈降した。免疫沈降後のサンプルを、2次元電気泳動し、HA-tagged Wnt9/14過剰発現サンプルのゲルに特異的に得られるタンパク・スポットを、質量分析法を用いて同定した。その結果、Interferon-ind ucedprotein tetrapeptide repeats3およびnovel proteinが、Wnt9/14の結合タンパクであることが判明した。

The results of the previous year (H18) indicated that Wnt-9 had a neuroprotective effect on neuronal cell death and inhibition of caspase-3 activation in vitro and in vitro in cultured retinal undifferentiated cells, R28 cells. Wnt is the most important thing to do. C-terminal HA-tagged Wnt9, C-terminal HA-terminal HA-tagged Wnt9, C-terminal HA-terminal HA-tagged Wnt9, C-terminal HA-terminal HA-tagged Wnt9, C-terminal HA-terminal HA-terminal After 24 hours, the cells were lysed and the whole cell lysate was SDAG-PAGE. It's called anti-HA antibody. It's called HA-tagged protein. As a result, it is possible to cut off the extracellular release of active Wnt9/14 and re-extract it In addition, Wnt9/14's anti-virus function was analyzed in detail, Wnt9/14's binding activity was determined in the same way, HA-tagged Wnt9/14 and HA-tagged contro vector were detected in 293 cells, and anti-HA antibody was used in immune sedimentation. After immune sedimentation, two-dimensional electrical swimming, HA-tagged Wnt9/14 detection of the specific characteristics of the serpentin-like surface, and quality analysis were used to determine the same results. Results, Interferon-found protein tetrapeptide repeats3 novel protein, Wnt9/14

项目成果

High frequency of open-angle glaucoma in Japanese patients with Alzheimer's disease

• DOI: 10.1016/j.jns.2006.02.009
• 发表时间: 2006-07-15
• 期刊: JOURNAL OF THE NEUROLOGICAL SCIENCES
• 影响因子: 4.4
• 作者: Tamura, Hiroki;Kawakami, Hideshi;Mishima, Hiromu K.
• 通讯作者: Mishima, Hiromu K.

Proteome profiling of embryo chick retina

• DOI: 10.1186/1477-5956-6-3
• 发表时间: 2008-01-22
• 期刊: PROTEOME SCIENCE
• 影响因子: 2
• 作者: Mizukami, Mina;Kanamoto, Takashi;Kiuchi, Yoshiaki
• 通讯作者: Kiuchi, Yoshiaki