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キトサンおよび合成ペプチドを用いた表皮細胞組込み型創傷被覆材の開発

使用壳聚糖和合成肽开发表皮细胞整合伤口敷料

基本信息

批准号：
15791028
负责人：
池本繁弘
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

南年度の予備実験において以下の結果が得られた。(1)現在確認されているラミニン分子上の種々の細胞接着活性ペプチドの中で、ヒト培養表皮細胞に対して最も接着活性を有するペプチド(AG-73ペプチド)を同定した。(2)ヒト正常表皮およびヒト培養表皮細胞においてAG-73ペプチドのリガンドであるシンデカンの発現を免疫組織学的に確認した。(3)海産甲殻類から抽出される高分子であるキチン・キトサンをベースとした膜にAG-73ペプチドを共有結合させることにより、ヒト培養表皮細胞を接着させた表皮細胞組込み型創傷被覆材を作製した。(4)キトサンのクロロアセチル化の程度、播種する細胞数、接着に要する時問等について様々な条件で検討し、単離した状態の表皮細胞を最も効率良く被覆材に組込む条件を決定した。これらの結果をもとに表皮細胞組込み型創傷被覆材を用いた実験動物への単離培養表皮細胞の移植を試みた。ヌードマウスの側腹部に皮膚欠損創を作成し,表皮細胞組込み型創傷被覆材を移植して経時的に移植部の組織を観察した。移植後3日目では移植表皮細胞はいくつかのコロニーや数層に重なる細胞のシートを形成しており、移植後7日目にはその大きさや重層化の程度が増していた。これらの細胞が移植された表皮細胞であるか否かについて種特異的なマーカー(ヒトサイトケラチン特異抗体など)を活用して確認した。また、表皮細胞に対するマーカーや電子顕微鏡法を用いて移植された表皮細胞の分化度や基底膜の形成状態などにっいても評価した。今回の実験では、単離した状態の表皮細胞であっても今回開発した細胞接着活性を有する被覆材を用いることにより、移植床での重層化を含む表皮様構造の形成が可能であることを証明した。これは培養表皮移植における新しい視点からのアプローチとして将来の臨床応用が期待された。

In the south of the year, the following results have been successful. (1) it is now confirmed that several kinds of yeast cells on the molecule are connected to the active cells, and the cells of the epidermis are the most active, and the activity is the same as that of AG-73 cells. (2) normal epidermis, normal epidermis, AG-73 cells, normal epidermis, normal epidermis. (3) the sea beetle was extracted from the sea beetle, and the high molecular weight was extracted. The membrane was coated with AG-73. The cells of the epidermis were cultured, and then the cells of the epidermis were cultured. (4) the optimal conditions such as the degree of curing, the number of cells sown, and the following temperature conditions, such as temperature, temperature, Results the experimental results showed that the epidermis cell transplantation test was performed on the covered material with the same kind of animal material. The skin of the abdomen was made, and the tissue of the epidermis was examined at the beginning of the transplantation. Three days after transplantation, the epidermis was grafted, and the epidermis was grafted. The epidermis cells were transplanted and the epidermis cells were implanted. The epidermis cells were implanted. The cell differentiation of epidermis and epidermis was determined by the method of cell differentiation and the basement membrane was formed by the method of cell differentiation. This time, this time, the temperature of the epidermis is different. This time, the cells of the epidermis have been opened, and then the cladding material has been used. The transplant bed has been reshaped. It is possible that the epidermis has been made. The epidermis is transplanted into the skin in order to get a new point.