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コラーゲン膜上に構築した培養粘膜上皮シートの粘膜欠損部位への移植に関する研究

胶原膜构建的培养粘膜上皮片移植至粘膜缺损部位的研究

基本信息

批准号：
15791160
负责人：
森山孝
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

口腔粘膜欠損補填材料としての培養粘膜シートの作成に関する基礎実験を行った。口腔粘膜欠損として本研究ではビーグル犬の口蓋粘膜欠損モデルを作成した。まず。粘膜上皮角化細胞の培養条件の決定を行った。ビーグル犬の上皮角化細胞は採取した粘膜片をdispase処理し上皮層を分離採取し、その上皮層をtrypsin処理することにより単離した。単離した上皮角化細胞をコラーゲンコートされた細胞培養用ディッシュにて培養を行ったが、初代培養は反復して成功するものの継代培養は困難であった。そのため、実験には初代培養の上皮角化細胞を供した。ビーグル犬の口腔内用より粘膜片(5×5mm)を採取し、前述したように上皮角化細胞を単離し、type Iコラーゲンシート状に播種した。細胞濃度は概ね1×10^5/cm2となるようにし、ヒト角化細胞培養用培地(血清無添加)にて培養を行った。培養開始後約1週間でsubconfluentとなった。ビーグル犬の口蓋両側にそれぞれ1×1cmの口蓋粘膜欠損(骨膜上)を作成した。欠損に角化細胞を播種した面が触れるように先に培養を行った培養粘膜シートを貼付し、周囲をナイロン糸にて縫合固定し、ワセリンガーゼにて圧迫した。片側に培養粘膜シート移植を行い、対照として反対側にはコラーゲンシートのみを貼付した。一週間後に圧迫を除去し、創の経過を観察した。移植後2週間で実験群、対照群ともに創収縮が観察されたが、術後4週では実験群より対照群の方が創収縮の程度が大きかった。また、術後4週において実験群では良好な角化層を有する上皮が観察されたが、移植した培養粘膜シートが生着したものかについては今後新たな実験系にて判断する予定である。

Oral mucosa defect filling materials and culture of mucosa related to the preparation of basic practice The oral mucosa defect was established in this study.まず。The determination of culture conditions for keratinized cells of mucosal epithelium was carried out. The epithelial keratinocytes of the dog are separated from the upper cortex by using the mucosa dispase treatment and the upper cortex trypsin treatment. Cell culture is difficult for epithelial keratinization. The primary culture of epithelial keratinocytes was conducted. The oral mucosa of dogs (5×5mm) was collected and seeded in the form of epithelial keratinocytes. Cell concentration is 1×10^5/cm2. Culture medium for keratinized cell culture (without serum addition) About 1 week after the start of culture, subconfluent 1×1cm of the flap mucosa was damaged (above the periosteum). The damaged keratinized cells were seeded on the surface and cultured under pressure. The culture of the mucosa on the side of the film was carried out in the middle of the film, and the culture of the mucosa on the opposite side was carried out in the middle of the film. After the week, pressure was removed and the new situation was observed. 2 weeks after transplantation, the degree of wound reduction in the group and the group was significantly higher than that in the group 4 weeks after transplantation. At 4 weeks after surgery, the epithelial layer of the group was well established, and the transplanted cultured mucosa was developed.