Lokalisierung Replikations- und Transkriptionsaktiver "Factories" in vivo

在Zellkern的特定领域或“焦点”状态下发现DNA的转化、转录和RNA加工，这些自动生成的DNA也被称为“工厂”韦尔登。这是一个非常复杂的问题，它需要在一个功能分区中创建一个“焦点”，以使转录变得更清晰。在这个项目中，我用Blick在黑腹果蝇体内的Zellkernen非重复性多基因组中观察到的DNA片段的排列和转录。大足在我的工作中，与C博士的工作组合作。Cardoso（MDC柏林）转基因Verdoledene Stämme hergestellt. GFP-PCNA可作为阳性细胞标记物。转基因的表达是Ga 14诱导的。通过活体数字成像显微镜观察标记蛋白的三维表达，可以在动物体内进行特异性表达。在Möglichkeit之后，我们也可以看到，染色体的大小并不直接影响韦尔登的正常发育。Koexpression beider Proteine mit unterschiedlicher Markierung soll den direkten Vergleich der 3D Anordnung kations- und Transkriptions-aktiver Stellen ermöglichen。

DNA Replikation, Transkription und RNA Processing finden im Zellkern in speziellen Domänen oder "Foci" statt, die von einigen Autoren auch als "Factories" bezeichnet werden. Es wurde mehrfach vermutet, daß solche Replikationsfabriken in einer funktionellen Beziehung zu den "Foci" der Transkription stehen könnten. Im vorgeschlagenen Projekt möchte ich mit Blick auf diese Fragestellung die Beziehung zwischen den Orten der Replikation und der Transkription in Zellkernen unterschiedlichen Polytäniegrades bei Drosophila melanogaster untersuchen. Dazu wurden in meiner Abteilung und in Zusammenarbeit mit der Arbeitsgruppe von Frau Dr. C. Cardoso (MDC Berlin) verschiedene transgene Stämme hergestellt. GFP-PCNA wird als Marker für Replikations-aktive Stellen verwendet. Die Expression der Transgene ist Ga14 induzierbar. Nach Gewebe-spezifischer Expression in Speicheldrüsen unterschiedlicher larvaler Stadien wird die 3D Verteilung der markierten Proteine mit hochauflösender Digital Imaging Mikroskopie in vivo untersucht. Dabei sollen nach Möglichkeit auch die räumlichen Beziehungen chromosomal nicht direkt benachbarter Regionen ausgewertet werden. Koexpression beider Proteine mit unterschiedlicher Markierung soll den direkten Vergleich der 3D Anordnung Replikations- und Transkriptions-aktiver Stellen ermöglichen.