人工ウイルスを用いる遺伝子運搬(ジーンデリバリー)システムの構築

使用人工病毒构建基因传递系统

• 批准号: 04J00813
• 负责人: 金森 拓也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J00813/
• 关键词: 人工ウイルス; 遺伝子運搬; プラスミドDNA; 大環状糖クラスター化合物; 超分子複合体; 蛍光共鳴エネルギー移動(FRET); 蛍光顕微鏡; 培養細胞

プラスミドDNAを大環状糖クラスター化合物と水溶液中で複合化させることによって、ウイルス並に小さな直径(〜50nm)を持つ遺伝子複合体「グリコウイルス」が生成することが明らかとなっている。グリコウイルスの粒子径に関する観察から、プラスミドDNAと大環状糖クラスター化合物との間には、ある一定の複合化比率が存在することが強く示唆されていた。しかし、粒子のサイズは多くのファクターが複雑に関与して決定されるものと考えられる。プラスミドDNAと大環状糖クラスター化合物との直接の相互作用を抽出するために、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を利用して解析を行った。プラスミドDNAにFRETのアクセプター、大環状糖クラスター化合物にFRETのドナーとなる蛍光団をそれぞれ標識した。一定量のプラスミドDNAに対して大環状糖クラスター化合物の量を変化させながら添加し、FRETのアクセプターから生じる蛍光強度を測定した。その結果、FRETによる蛍光は複合化比率が0から0.6までは直線的に増加したが、0.6よりも大きな領域ではその増加の割合がごく小さくなった。複合化比率0.6という値は、粒子径から得られたそれと一致した。プラスミドDNAと大環状糖クラスター化合物を異なる色で蛍光標識し、それらをもちいてグリコウイルスを生成させた。これを培養細胞に取り込ませて蛍光顕微鏡で観察したところ、48時間後においても複合体の状態を保った粒子が存在することが確認された。

In the aqueous solution of large-scale DNA compounds, it is necessary to synthesize the molecular weight and the diameter (~ 50nm) of the complex to form the recombinant DNA. The size of the particles, the size Particles, particles and particles. In this paper, we study the direct interaction of DNA compounds, extraction and photospectrophotometry (FRET). The chemical analysis is used to analyze the lines. This is due to the presence of DNA, FRET, and environmental sugar. The chemical compound, FRET, is sensitive to light emission. A certain amount of DNA was used to determine the amount of compounds in the environment, such as the addition of chemical compounds, the addition of FRET, the determination of light intensity, the determination of light intensity. The results show that the FRET replication ratio is 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6%, 0. 6% and 0. 6%. The replication ratio is 0.6%, and the particle diameter is consistent. In the DNA environment, chemical compounds are used to determine the color of the compound and the color of the compound. After 48 hours, we need to check the status of the complex to ensure that the particles are in the presence of a critical mass.