内分泌攪乱化学物質による魚類生体防御機能への影響

内分泌干​​扰物对鱼类生物防御功能的影响

• 批准号: 04J01475
• 负责人: 綿貫 泰亘
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J01475/
• 关键词: 内分泌撹乱化学物質; コイ; サイトカイン; 内分泌攪乱化学物質; 魚類生体防御

コイの頭腎組織に内分泌撹乱化学物質を暴露させ、サイトカイン遺伝子の発現量の変化について半定量解析を用いて計時的な変化を確認した。コイ頭腎組織をin vitroで内分泌撹乱化学物質であるジ-n-ブチルフタレート(DBP)またはフタル酸ジ-2-エチルヘキシル(DEHP)でそれぞれ10nMの濃度にて1,8,24時間処理した。その後、ISOGEN(NipponGene, Japan)を加え、RNA抽出までの間、-80℃に保存した。明らかになっているコイのcDNA塩基配列より、β-アクチン、インターロイキン(IL)-1β、IL-10に対して特異的なプライマーを作製し、PCRに用いた。コイから摘出した頭腎組織をホモジナイズし、Total RNA抽出した。このTotal RNAをテンプレートに、ReverTra Dashを用いてRT一PCRを行った。RT-PCRを行ったのち、β-アクチンは25サイクル、サイトカイン遺伝子は、30サイクルでそれぞれを特異的なプライマーを用いてPCRを行った。PCR終了後、2%アガロースゲルにて電気泳動を行った後、デジタル撮影によりバンドをTIFF画像ファイルとして保存した。保存したファイルを定量化し、サイトカイン遺伝子/β-アクチンの比を求めグラフを作製した。DBPを暴露させたコイ頭腎組織での、IL-1β遺伝子の発現量は24時間後に最大の発現量を示した。また、IL-10遺伝子の発現量は、8時間後まで減少し、24時間後には、0時間の発現量まで回復した。DEHPを暴露させたコイ頭腎組織での、IL-1β遺伝子の発現量は、8時間後まで上昇し、24時間後には、0時間の発現量まで減少した。また、IL-10遺伝子の発現量は、24時間後に減少した。これらの事実は、内分泌撹乱化学物質が炎症性または抗炎症性サイトカイン遺伝子の発現に影響を及ぼし、その結果、疾病等に対する抵抗力の低下を招く可能性を示唆している。以上の結果から、魚類の免疫系と内分泌撹乱化学物質には、密接な係わりがあることが証明された。

Exposed to endocrine disrupting chemicals in kidney tissues, semi-quantitative analysis of changes in the amount of endocrine disruptors identified by time-based analysis Endocrine-disrupting chemicals in the kidney tissue of the head and kidney were treated at concentrations of 10nM for 1, 8, and 24 hours. ISOGEN(NipponGene, Japan) was added and RNA was extracted and stored at-80℃. The cDNA base alignment of the target gene, β-amyloid, interleukin (IL)-1β, IL-10, and the specific cDNA base alignment of the target gene, PCR, were studied. Total RNA extracted from kidney tissue Total RNA, Reverse Tra Dash, and PCR RT-PCR is a unique method of PCR. After PCR termination, 2% of the samples were stored in the TIFF database. Preserve the right to quantify and determine the ratio of β-proteins to β-proteins IL-1β gene was found in kidney tissue after 24 hours of exposure to DBP. Moreover, the amount of IL-10 gene detection decreased after 8 hours, and the amount of IL-10 gene detection returned to 0 hours after 24 hours. IL-1β gene production increased after 8 hours, decreased after 24 hours and decreased after 0 hours of DEHP exposure. IL-10 gene production decreased after 24 hours. The effects of endocrine disrupting chemicals on the development of inflammatory and anti-inflammatory cytokines and on the possibility of lowering resistance to diseases and other diseases are discussed. The above results show that the immune system of fish is disturbed by chemical substances.