植物病原菌の遊走子運動機構〜マスチゴネマの構造と機能〜

植物病原菌的游动孢子运动机制～鞭毛虫的结构与功能～

• 批准号: 04J02483
• 负责人: 有川 幹彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nara Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J02483/
• 关键词: 疫病菌; phytophthora; 遊走子; マスチゴネマ; ストラメノパイル; モノクローナル抗体; Phytophthora

本研究では、Phytophthora(エキビョウキン属)とその近縁種及び原生動物において、遊走子の鞭毛機能、特に細胞の推進力発生におけるマスチゴネマの働きを分子レベルで明らかにすることを目的とした。これまでに、その基礎研究において作製したPhytophthora遊走子のマスチゴネマに対するモノクローナル抗体を用いて、蛍光抗体法および免疫電子顕微鏡法により、その抗原タンパク質の遊走子細胞における局在性を明らかにした。今回、この特異性の高い抗体を用いて、免疫沈降法による抗原タンパク質、すなわち、マスチゴネマ構成タンパク質の高純度精製を試みた。遊走子からではなく菌糸から粗抽出を行うことにより、目的タンパク質のロスを最小限に抑えた。また、粗抽出液をsepharose beadsでpre-washすることにより、非特異的に吸着するタンパク質の最終試料への混入を防いだ。更に、精製過程の遠心操作を極力軽く行うことにより、機械的作用による結合タンパク質の解離を防いだ。最終試料を電気泳動法によって分離し、精製度の高いマスチゴネマ構成タンパク質を得た。現在、切り出した目的タンパク質の部分アミノ酸配列を解析中である。

This study で は, Phytophthora (エ キ ビ ョ ウ キ ン) と そ の nearly try kind and び protozoa に お い て, wandering の に cell の flagella function, propulsion, born 発 に お け る マ ス チ ゴ ネ マ の 働 き を molecular レ ベ ル で Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. こ れ ま で に, そ の basic research に お い て cropping し た Phytophthora wandering son の マ ス チ ゴ ネ マ に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody with い て, 蛍 light antibody お よ び immune electron 顕 micro mirror method に よ り, そ の antigen タ ン パ ク qualitative の wandering daughter cells に お け る bureau in the sexual を Ming ら か に し た. Today, back こ の high specificity の を use い い antibody て, immune sink に よ る antigen タ ン パ ク qualitative, す な わ ち, マ ス チ ゴ ネ マ constitute タ ン パ ク qualitative の high-purity refined を try み た. Wandering son か ら で は な く bacteria si か ら crude extraction line を う こ と に よ り, purpose タ ン パ ク qualitative の ロ ス を minimum に え suppression た. ま た, crude extract を sepharose beads で pre - wash す る こ と に よ り, nonspecific に sorption す る タ ン パ ク qualitative の final sample へ の を with anti い だ. More に, refining process の telecentric operation を strongly 軽 く line う こ と に よ り, the action of mechanical に よ る combining タ ン パ ク qualitative の dissociation を anti い だ. The final test material was separated by the を electrical gas movement method によって, and the <s:1> fine system <s:1> high <s:1> スチゴネ スチゴネ スチゴネ <e:1> was formed to obtain タ <e:1> パ を and を, resulting in た. Now, it is necessary to clearly identify the た objective タ タ パ パ in the part of the spermatial gland ア を ノ acid composition を in the analysis である.