植物病原菌の遊走子運動機構〜マスチゴネマの構造と機能〜

植物病原菌的游动孢子运动机制～鞭毛虫的结构与功能～

• 批准号: 04J02483
• 负责人: 有川 幹彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nara Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J02483/
• 关键词: 疫病菌; phytophthora; 遊走子; マスチゴネマ; ストラメノパイル; モノクローナル抗体; Phytophthora

本研究では、Phytophthora(エキビョウキン属)とその近縁種及び原生動物において、遊走子の鞭毛機能、特に細胞の推進力発生におけるマスチゴネマの働きを分子レベルで明らかにすることを目的とした。これまでに、その基礎研究において作製したPhytophthora遊走子のマスチゴネマに対するモノクローナル抗体を用いて、蛍光抗体法および免疫電子顕微鏡法により、その抗原タンパク質の遊走子細胞における局在性を明らかにした。今回、この特異性の高い抗体を用いて、免疫沈降法による抗原タンパク質、すなわち、マスチゴネマ構成タンパク質の高純度精製を試みた。遊走子からではなく菌糸から粗抽出を行うことにより、目的タンパク質のロスを最小限に抑えた。また、粗抽出液をsepharose beadsでpre-washすることにより、非特異的に吸着するタンパク質の最終試料への混入を防いだ。更に、精製過程の遠心操作を極力軽く行うことにより、機械的作用による結合タンパク質の解離を防いだ。最終試料を電気泳動法によって分離し、精製度の高いマスチゴネマ構成タンパク質を得た。現在、切り出した目的タンパク質の部分アミノ酸配列を解析中である。

这项研究旨在阐明乳腺癌在分子水平上的功能，尤其是在植物疫霉（雌性属），其相关物种和原生动物中的细胞推进方面的发展。迄今为止，使用对基础研究中产生的植虫thora Zoopoperoporemastormostoragor的单克隆抗体，通过免疫荧光免疫学技术和免疫电子显微镜揭示了抗原蛋白在Zoo孢子细胞中的定位。在本文中，我们试图使用这种高度特异性的抗体纯化抗原蛋白，即使用免疫沉淀的乳腺癌组成蛋白。通过从菌丝体中进行粗萃取，而不是从气囊孢子中提取，可以最大程度地减少靶蛋白的损失。此外，用sepharose珠对粗提取物进行预洗，以防止非特异性吸附蛋白被污染到最终样品中。此外，通过在纯化过程中尽可能容易地进行离心，可以防止结合蛋白质的解离。最终样品通过电泳分离，以获得高度纯化的乳腺癌组成蛋白。目前，正在分析切除靶蛋白的部分氨基酸序列。