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葉緑体mRNAの翻訳機構の解析

叶绿体mRNA翻译机制分析

基本信息

批准号：
04J05643
负责人：
中村崇裕
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J05643/
关键词：
葉緑体翻訳 DNAマイクロアレイタバコ

项目摘要

葉緑体は、光合成を行う植物固有の細胞小器官で、独自のゲノムとその遺伝子発現系を持つ。葉緑体遺伝子の発現における最終的なタンパク質合成量は、転写レベルやRNAの蓄積量にあまり影響を受けず、翻訳レベルに依ることが明らかにされているが、そのメカニズムは不明な点が多い。本研究は、葉緑体in vitro翻訳系(葉緑体抽出液で正確な蛋白質合成を行う反応系)、葉緑体DNAマイクロアレイ、in silico解析を用い、葉緑体mRNAの翻訳制御配列、及びそこに結合する因子を広域的に解析し、葉緑体の翻訳制御機構を明らかにすることを目的としている。昨年度は様々な生理的条件下で翻訳が活性化するmRNA群をクラス分けし、各クラスより5'UTRに存在する約20種類の保存配列を抽出した。本年度は、この保存配列が翻訳に必要な制御配列であることを明らかにするために、レポーター遺伝子の5'UTRに同定した保存配列を融合したコンストラクトを作製し、このコンストラクトの翻訳効率をタバコ葉緑体in vitro翻訳系を用いて検証した。その結果、同定したいくつかの保存配列が実際に翻訳制御配列として機能することを明らかにした。しかし、黄化葉(もやし、BY-2細胞)で翻訳されるmRNAから抽出した保存配列は緑葉から調製したin vitro翻訳系で機能しなかった。黄化葉では緑葉とは異なるシステムによって、翻訳が制御されるためだと考えられる。今年度は、黄化葉よりin vitro翻訳系を調製し、黄化葉での翻訳に機能する配列を検証した。その結果、いくつかの保存配列は実際に翻訳制御配列として機能することが明らかになった。解析を行った翻訳制御配列をプローブにして、その配列に特定機に結合する蛋白質をUVクロスリンク法で解析したところ、緑化葉、黄化葉で異なる分子量の蛋白質が検出された。本研究で得られた結果は、色素体の分化過程によって、異なる蛋白質によって、翻訳が制御されていることを示している。

Chloroplasts, photosynthetic cells, small organs of cells inherent in plants, and independent cells. The final amount of chloroplast residues synthesized and accumulated in RNA Influenced by けず, translated by ることが明らかにされているが, そのメカニズムは unknown な点が多い. In this study, chloroplast in vitro translation system (chloroplast extract liquid and correct protein synthesis and reaction system), chloroplast DNA DNA testing system, in Silico analysis function, chloroplast mRNA translation control sequence, and binding function The analysis of the sub-region and the control mechanism of the chloroplast are clear and clear. Last year, under the physiological conditions of the year, the mRNA group was activated and the 5' UTR of each RNA group was activated, and about 20 types of preserved arrays were extracted. This year's preservation arrangement is necessary, the control arrangement is necessary, and the control arrangement is necessary. TRに同定したsave arrangementをfusionしたコンストラクトをproductionし、このコンストラクトの訳efficiencyをタバコchloroplast in The in vitro translation system has been proven to be useful. The result of その, the same set of したいくつかのsave arrangement が実interiorにturn訳control arrangement としてfunction することを明らかにした.しかし, etiolated leaves (もやし, BY-2 cells) are translated into でされるmRNA and are extracted and stored in a sequence and prepared in vitro. Yellow leaves, green leaves, and green leaves. This year, the in vitro translation system of yellow leaves is prepared, and the function of yellow leaves is prepared and certified.その results, いくつかのsave arrangement は実界にturn訳control arrangement としてfunction することが明らかになった. Analyze and analyze the specific mechanism and combination of protein and UVクロスリンク法でanalyticalしたところ, green leaves, yellowing leavesでisoなる molecular weightの検出された. In this study, the results of the study were obtained, the differentiation process of the chromatophore was determined, the different protein components were detected, and the transformation process was determined.