权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

試験管内翻訳・複製系を利用したタバコモザイクウイルスRNA複製機構の解明

使用体外翻译/复制系统阐明烟草花叶病毒 RNA 复制机制

基本信息

批准号：
04J09258
负责人：
薦田圭介
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

タバコモザイクウイルス(TMV)やトマトモザイクウイルス(ToMV:かつてはTMV-L系統と表記)をはじめとするトバモウイルスのRNA複製複合体は、宿主細胞中の生体膜上に形成されることが知られている。前年度までに、生体膜除去BY-2抽出液(mdBYL : membrane-depleted BYL)を用いてToMV RNAを試験管内翻訳すると、反応液中に複製複合体の膜結合前前駆体であるPMTC(pre-membrane targeting complex)が蓄積されることを示した。今年度はPMTC形成過程のさらなる解析のため、複製タンパク質である130K,180Kタンパク質を単独にコードするRNAを作製して、mdBYL反応液で個別に翻訳反応させてから混合し、PMTCの構築実験を行った。その結果、まず130Kタンパク質とゲノムRNAが結合してPMTCのコアとなる複合体(コアPMTC)が形成され、その後で180Kタンパク質が相互作用することによりPMTCが形成される可能性が示唆された。また、コアPMTCをアフィニティー精製したところ、数種類の宿主由来の因子が共精製されてきたため、それらの部分アミノ酸配列を質量分析法によって決定し、植物ゲノムデータベースと照合して当該因子を同定した。現在、同定された各宿主因子の遺伝子をT-DNAによって破壊したシロイヌナズナを入手し、各宿主因子がトバモウイルスの増殖に関与するかを解析中である。上記の研究成果の一部は、Journal of Virology(2007)に発表した。また、平成18年度日本植物病理学会大会で口頭発表し、またThe American Society for Virology 25^<th> Annual Meeting(国際学会)でポスター発表した。

The RNA replication complex of the TMV (TMV) or TMV (ToMV: TMV-L system) is formed on the membrane of the host cell. In the previous year, the accumulation of PMTC(pre-membrane targeting complex) in the BY-2 extract (mdBYL : membrane-depleted BYL) was demonstrated when ToMV RNA was used in the assay tube. This year, the PMTC formation process was analyzed, replicated, and purified at 130K,180K, and purified by RNA, mdBYL, and mixed with PMTC. The results show that the 130K protein and RNA binding to PMTC and the formation of PMTC complexes (PMTC complexes), and the 180K protein interaction between PMTC and RNA, indicate the possibility of PMTC formation. The factors of host origin of several species are refined and determined by mass spectrometry, and the factors of host origin are determined by mass spectrometry. At present, the T-DNA sequence of host factors is analyzed and the relationship between host factors and their propagation is analyzed. Part of the research results of the above report was published in Journal of Virology(2007). The American Society for Virology 25^<th>Annual Meeting(International Society)