遺伝子改変ブタを用いたヒト造血幹細胞評価システムの構築
转基因猪构建人类造血干细胞评价体系
基本信息
- 批准号:04J10370
- 负责人:
- 金额:$ 1.47万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2004
- 资助国家:日本
- 起止时间:2004 至 2006
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
我々の研究室では既に経子宮的にブタ胎児腹腔内に臍帯血由来のヒト造血幹細胞を移植し、出生後ヒト血球細胞をもった血液キメラブタの作製に成功していた。しかしこれらのブタ血液中にしめるヒト細胞の頻度は非常に低いため、ブタ体内におけるヒト血球細胞のgrowth advantageを得るため、遺伝子破壊によって高度の貧血をきたすようなレシピエントブタを作製することにした。標的とする遺伝子としては、c-kit遺伝子とPU.1遺伝子を試みた。農業科学技術研究所より梅山ブタ、ランドレースブタ由来の細胞を採取してもらい各ブタ数個体由来のゲノムライブラリーを作製した。このライブラリーをスクリーニングし、PU.1、c-kit各遺伝子座の15〜20Kbのゲノム断片を得た。ブタなどの家畜動物は個体間での遺伝的多系が存在し、そのため相同組み換えに用いる細胞と同じ個体(isogenic)由来のコンストラクトを用いる必要がある。そめため、それぞれの遺伝子に対し、数個体由来のコンストラクトを構築した。構築したベクターをそれぞれのブタ由来の初代培養繊維芽細胞に導入し、薬剤選択を行った後、PCRによって標的遺伝子座の相同組み換えの有無をスクリーニングした。しかし、ブタ繊維芽細胞はこれらのlocusにおいて非常に相同組み替え効率が低く、合計約2000クローンのスクリーニングのうち組換えの検出は9クローンのみしか得られなかった。また、クローニングした組換え細胞は、核移植によってブタ個体を作製するにあたって、非常に増殖状態が悪く、今のところ利用しうる株は得られていない。相同組み換えの効率を上げるため、ベクター側において、polyA less, promotor lessなどのテクニックを導入しているところである。
Our laboratory has successfully established a system for the transplantation of hematopoietic stem cells from fetal abdominal cavity and postnatal blood cells. The frequency of blood cells is very low, the growth advantage of blood cells in the body is very high, and the anemia is very high. The target is a c-kit. The Institute of Agricultural Science and Technology has adopted a number of measures to control the origin of the plant cells. The 15 ~ 20Kb fragments of each gene of PU.1 and c-kit were obtained. The multi-lineage of inter-individual inheritance of livestock and animals exists, and the same group of cells and isogenic origin are necessary for use. The number of individuals who are involved in the construction of the project is estimated to be 100 million. Construction of the same set of PCR target loci after introduction into primary cultured embryonic cells, selection of DNA, and presence or absence of DNA. The rate of cell regeneration is low, totaling about 2000 kms. In the case of nuclear transplantation, the plant is in a state of proliferation and utilization. The same group of motor motors can be used to improve the efficiency of motor motors.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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