二本鎖DNA切断修復系及び塩基除去修復系の連係と欠失及び挿入型変異の関連

双链DNA断裂修复系统与碱基切除修复系统的联动以及缺失与插入突变的关系

• 批准号: 04J11804
• 负责人: 柴田 淳史
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J11804/
• 关键词: Poly(ADP-ribose)polymerase-1; Nonhomologous end joining; Homologous recombination; DNA double strand break; Parp-1; NHEJ; DSB; ポリ(ADP-リボース)合成酵素(Parp-1); 塩基除去修復; Non-homologous end joining (NHEJ); 二本鎖DNA切断; 非相同末端結合; DNA日本鎖切断修復; 欠失; 挿入; 転移型変異

ParpのDSB修復への関与を検討するため、2006年4月よりDSB修復研究の権威である英国サセックス大学Prof.Penny Jeggo研究室において研究を行った。Jeggo研究室では、DSB切断後にリン酸化され細胞内でフォーカスを形成するH2AXをDSBのマーカーとして用いている。放射線照射後にリン酸化H2AX(γ-H2AX)の抗体を用い免疫蛍光染色した後、γ-H2AX fociを計測することによりDSBの絶対数を評価する。Parpファミリーの中でもParp-1及びParp-2がDNA切断端に結合し活性化されることが知られているため、本研究では双方の活性を阻害するParp阻害剤を用いてNHEJへの関与を検討した。放射線照射後のDSBは、G1期においてNHEJのみで修復されることが知られているため、G1期に同調後、放射線照射後のγ-H2AX fociを計測した。DNA-PK、Ku80及びDNA ligaseIV欠損細胞では顕著なγ-H2AX fociの消失遅延が認められたが、野生型細胞に対するParp阻害剤の添加ではγ-H2AX fociの消失遅延は認められなかった。DNA-PK、Ku80及びDNAligaselV欠損細胞にParp阻害剤を添加したところ、Ku80欠損細胞においてのみ放射線照射後のγ-H2AX fociの消失が全く認められなかった。NHEJに関与することが近年発見されたXLFの欠損細胞に対してParp阻害剤の効果を検討した。XLF欠損細胞はγ-H2AX fociの消失遅延を示すが、Parp阻害剤の添加はさらなる遅延を示した。以上の結果から、Parp阻害剤はKu80及びXLF欠損下におけるDSB修復を抑制したため、DSB後のParpの活性化はKu80及びXLF欠損下でのNHEJのバックアップ経路を促進している可能性が考えられた。

In April 2006, Parp

项目成果

Agent-dependent effects of PARP-1 deficiency on DNA damage responses and genomic stability in mouse ES cells

PARP-1 缺陷对小鼠 ES 细胞 DNA 损伤反应和基因组稳定性的药物依赖性影响

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nova Science Publishers, Inc. 6
• 作者: Ogino H;Shibata A;Gunji A;Suzuki H;Nakagama H;Sugimuta T;Masutani M
• 通讯作者: Masutani M

An efficient method for mapping and characterizing structures of deletion mutations in gpt delta mice using Southern blot analysis with oligo DNA probes

一种使用寡 DNA 探针进行 Southern 印迹分析来绘制和表征 gpt delta 小鼠缺失突变结构的有效方法

• 发表时间: 2004
• 期刊: Environ. Mol. Mutagen 43
• 作者: Shibata A;et al.
• 通讯作者: et al.

Parp-1 deficiency causes an increase of deletion mutations and insertions/rearrangements in vivo after treatment with an alkylating agent

Parp-1 缺陷导致烷化剂治疗后体内缺失突变和插入/重排增加

• 发表时间: 2005
• 期刊: Oncogene 24
• 作者: Shibata A;et al.
• 通讯作者: et al.