凍結乾燥法による新しいマウス精子保存法の開発

冷冻干燥法开发小鼠精子保存新方法

• 批准号: 15680013
• 负责人: 金子 武人
• 金额: $ 14.98万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15680013/
• 关键词: マウス; 精子; 凍結乾燥; ICSI

凍結乾燥したマウス精子から正常な産子が得られることが明らかになったことから、凍結乾燥法を新しいマウス精子保存法として応用することを本研究の目的とした。凍結乾燥後のマウス精子は4℃での保存が可能であることが既に示唆されている(Kaneko 2003)。しかしながら、長期保存後の精子の状態、また保存温度が凍結乾燥精子に与える影響は明らかにされていない。そこで本研究では、異なる温度で保存したマウス凍結乾燥精子の受精能を評価することで、受精能を高率に保持することのできる凍結乾燥精子の最適条件について検討した。精子は、十分に成熟(11週齢以上)しだB6D2F1マウスの精巣上体尾部より回収した。Kanekoら(2003)の方法に従い精子懸濁液は凍結乾燥された。凍結乾燥精子は、-70、-20、4および25℃で一定期間保存された。その後、精子は卵細胞質内精子注入法(ICSI)を用いてB6D2F1マウス未受精卵子内に導入された。得られた受精卵の染色体解析及び産子への発生により保存後の凍結乾燥精子の受精能を評価した。4℃以下の温度下で保存された凍結乾燥精子の受精能は良好に保存され、5ヶ月間の長期保存においても受精能の低下は見られなかった。一方、25℃で保存された凍結乾燥精子は3ヶ月目に79%の精子において染色体の崩壊が認められ、5ヶ月目では97%の精子において染色体の崩壊が確認された。本研究において開発したマウス精子凍結乾燥法は、4℃での長期保存が可能であることが示された。また、室温での保存は3ヶ月以内の短期間であれば保存が可能であることから、凍結乾燥法は低コストの新しいマウス精子保存法としての応用が可能であると考えられる。

The sperm was dried, the sperm was preserved, and the sperm preservation method was used. After drying, the spermatozoa were stored at 4 ℃. It was possible that the spermatozoa were stored at 4 ℃. The sperm was not only instigated after drying (Kaneko 2003). After long-term preservation, the condition of sperm, the temperature of preservation, the temperature of dry sperm, and the temperature of storage, the shape of sperm, the state of sperm, the temperature of storage, the temperature of storage, the temperature of dry sperm and the temperature of storage. In this study, the temperature was used to save the dried spermatozoa. The fertilization rate could be maintained at a high rate and the sperm could be dried at a high rate. The sperm is very mature (more than 11 years old), B6D2F1 the tail of the upper body and back to the tail of the upper body. Kaneko method (2003) was used to determine the concentration of sperm in the solution and to dry it. The dried spermatozoa were stored at-70,-20 and 4 at 25 ℃ for a certain period of time. After pregnancy, the sperm were injected into the unfertilized egg by the method of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) with the method of sperm B6D2F1 injection. The chromosomes of fertilized eggs were analyzed and the fertilisation of dried spermatozoa after preservation. When the temperature is below 4 ℃, the fertilisation of dried spermatozoa can be preserved well, and the fertilization ability of long-term preservation for 5 months is lower than that of normal sperm. One side, stored at 25 ℃, dried sperm, 79% sperm, 79% sperm, chromosome collapse, 97% sperm, chromosome collapse, chromosome confirmation. In this study, sperm drying method and long-term preservation at 4 ℃ may be used in this study. After storage at room temperature and room temperature for less than 3 months, it is possible to test the temperature of the sperm preservation method during the short-term storage period of 3 months.