新規遺伝性腎がんラットのTransgenic rescueと遺伝子機能の解明

新型遗传性肾癌大鼠转基因拯救和基因功能的阐明

• 批准号: 15700315
• 负责人: 百瀬 修二
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Saitama Medical University (2004)Japanese Foundation For Cancer Research (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15700315/
• 关键词: Nihonラット; Birt-Hogg-Dube症候群; BHD遺伝子; トランスジェニックラット; 腎癌; Bhd遺伝子

新規遺伝性腎がんラットであるNihonラットの腎がん発生の原因が、ヒトのBirt-Hogg-Dube症候群の原因遺伝子であるBHD遺伝子のラットホモログに生じたgerm line mutationであることが明らかになった。本年度は、まず昨年度樹立した野生型Bhd遺伝子導入トランスジェニックNihonラットの表現型の解析を中心に行い、腎発癌の抑制と胎生致死の回避を複数の独立したラインで確認することができた。これらの結果からBhd遺伝子がNihonラットの腎発癌ならびに胎生致死の原因遺伝子であることを最終的に証明できたものと考える。またBhd産物の機能を明らかにする手がかりとして、以下の結果を得た。細胞内でのBhdの局在を、タグを付加した強制発現系を用いて検討した結果、核および細胞質の両方にびまん性に存在することが確認された。臓器における発現など内在性の発現様式に関しては、現在Bhdに対する特異抗体を用いて検討中である。またBhd結合タンパクに関して、Bhdに対する抗体を用いた免疫共沈降法とSDS-PAGEによる検討を行った結果、150kD付近の特異的なバンドを候補として認めた。現在このバンドを切り出し、アミノ酸配列のシークエンスを試みている。Bhdのリン酸化部位に関しては、ウェスタンブロットにより検出されるBhd産物の複数のバンドが、ホスファターゼ処理により、より移動度の速いバンドに収束することを確認した。次に、BhdをN末とC末に二分して発現させたところ、N末にリン酸化部位が存在することが予想された。現在リン酸化部位の候補となるセリン/スレオニンをアラニンに換えたアミノ酸置換Bhd変異体発現プラスミドを作製しており、それらを利用して最終的にリン酸化部位を同定する予定である。また、本研究においてはNihonラット腎癌由来の培養細胞に、Bhd遺伝子発現系を再導入した細胞株の樹立も進めた。現在樹立の最終段階であり、今後これらの細胞株をBhd産物の機能解析のツールとして利用する予定である。

New rules but 伝 sex kidney が ん ラ ッ ト で あ る Nihon ラ ッ ト の renal が ん 発 が の reasons, ヒ ト の Birt - cause of Hogg Dube syndrome の - but 伝 で あ る BHD heritage 伝 son の ラ ッ ト ホ モ ロ グ に raw じ た germ line mutation で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. This year は, ま ず last year set up し た wild-type Bhd heritage 伝 son import ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク Nihon ラ ッ ト の phenotype の parsing の 発 を center line に い, kidney cancer inhibition と viviparous death の avoid を plural の independent し た ラ イ ン で confirm す る こ と が で き た. こ れ ら の results か ら Bhd posthumous son 伝 が Nihon ラ ッ ト 発 の kidney cancer な ら び に viviparous son survived 伝 で の deadly reasons あ る こ と を eventually に prove で き た も の と exam え る. ま た Bhd product の function を Ming ら か に す る hand が か り と し て, the result of the following の を た. Intracellular で の Bhd の bureau in を, タ グ を plus し た 発 is now compulsory を with い て beg し 検 た results, nuclear お よ び cytoplasm の struck party に び ま ん sex に exist す る こ と が confirm さ れ た. Viscera に お け る 発 now な ど internality の 発 presently others type に masato し て は, Bhd now に す seaborne を る specific antibody with い て 検 beg in で あ る. ま た Bhd combining タ ン パ ク に masato し て, Bhd に す seaborne を る antibody with い た immune method of total sink と sds-page に よ る 検 line for を っ た results, pay nearly 150 kd の specific な バ ン ド を alternate と し て recognize め た. Now こ の バ ン ド を り し, cutting ア ミ ノ acid with column の シ ー ク エ ン ス を try み て い る. Bhd の リ ン acidification parts に masato し て は, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ り 検 out さ れ る Bhd product の plural の バ ン ド が, ホ ス フ ァ タ ー ゼ 処 Richard に よ り, よ り mobile degrees の speed い バ ン ド に 収 beam す る こ と を confirm し た. に, Bhd を N と C by the end of the late に binary し て 発 now さ せ た と こ ろ, at the end of the N に リ ン が acidification parts exist す る こ と が to think さ れ た. Now リ ン acidification parts の alternate と な る セ リ ン / ス レ オ ニ ン を ア ラ ニ ン に in え た ア ミ ノ acid replacement Bhd - variant 発 now プ ラ ス ミ ド を cropping し て お り, そ れ ら を using し て final に リ ン を acidification parts with fixed す る designated で あ る. ま た, this study に お い て は Nihon ラ ッ ト kidney origin の culture cell に, Bhd but 伝 発 を then now import し た cell lines の set も into め た. Now establish の ultimately Duan Jie で あ り, future こ れ ら の cell lines を Bhd product の function analytical の ツ ー ル と し て using す る designated で あ る.

项目成果

Prepro-orexin mRNA expression in the rat brain is increased during pregnancy.

妊娠期间大鼠脑中前食欲素原 mRNA 表达增加。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Neuroscience Letter 368(1)
• 作者: Kanenishi K;Ueno M;Momose S;Kuwabara H;Tanaka H;et al.
• 通讯作者: et al.

家族性腫瘍とゲノム TSC(ヒト結節性硬化症)

家族性肿瘤和基因组 TSC（人类结节性硬化症）

• 发表时间: 2004
• 作者: 百瀬修二;小林敏之;樋野興夫
• 通讯作者: 樋野興夫