マウス先天欠如歯に関与する染色体領域の特定

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これまでに第三臼歯の先天欠如を100%有する近交系マウスEL/Sea (EL)と野生型マウスMSM/Ms (MSM)の交配によりF1,2マウスを作製し、遺伝様式が常染色体劣性であること、歯欠損の遺伝要因を染色体3番のD3Mit106からD3Mit260までの約18cM領域に限定したことを報告した。本研究ではELおよびMSMを用い、MSMをドナーとし、MSMの染色体3番のD3Mit106からD3Mit260までの領域を、レシピエントであるELに導入するコンジェニックマウスを作製した。ELにMSMを交雑しF1をとり、F1をELに戻し交配をし、N2を10頭得た。これらのN2を生かしたまま尾からDNAを調整し、PCR-SSLPマーカーを用いた遺伝子型タイピングにより目的とする染色体3番の領域をヘテロ型にもった個体を選別した。このN2個体を用いて再びELに戻し交配をし、得られたN3世代に対し、上記操作を6回繰り返し、N7世代を得た。スピードコンジェニック法を用いたことにより、N7世代では染色体3番の目的以外の領域は99.9%以上ELホモ型となった。N7世代マウスを8週齢で安楽死させ上下顎骨を採取し、観察標本を作製した。実体顕微鏡下で第三臼歯の有無を評価し、染色体3番の目的領域がヘテロ型では第三臼歯が存在し、ELホモ型では歯が欠如したという結果を得、D3Mit106からD3Mit260までの約18cMの領域に原因遺伝子が存在することを証明した。さらにN7,N8世代マウスでD3Mit106からD3Mit260までの問で染色体組み換えを生じたマウスを交配に用い、N9世代を得た。D3Mit13からD3Mit25までの約4cMの領域がヘテロ型N9では第三臼歯が存在し、ELホモ型N9では歯が欠如したという結果を得、この領域に欠如歯の原因遺伝子が存在することを明らかにした。