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Development of cell therapies using reversibly immortalized human pancreatic beta cell lines

使用可逆永生化人胰腺β细胞系开发细胞疗法

基本信息

批准号：
16390380
负责人：
KOBAYASHI Naoya
金额：
$ 9.22万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16390380/
关键词：
lentiviral vector human telomerase gene insulin-secreting immortalized human cells animal model of diabetes international information exchange Canada ブタ糖尿病モデル

项目摘要

After thawing the cryopreserved islets with UW solution, the islet cells showed an efficient monolayer formation and facilitated effective lentivirus-mediated transduction. Monolayer formation of mouse islets was efficiently achieved by the use of extracellular matrices derived from 804G cells. We successfully made a diabetes model in pigs to perform total pancreatectomy. Such diabetic pigs died of ketoacidosis within 10 days after surgery. The model would be useful to assess the efficacy of diabetes-targeted cell therapies. A human pancreatic beta cell line that is functionally equivalent to primary beta cells has not been available. We established a reversibly immortalized human beta cell clone (NAKT-15) by transfection of primary human beta cells with a retroviral vector containing simian virus 40 large T antigen (SV40T) and human telomerase reverse transcriptase (hTERT) cDNAs flanked by paired recombination target loxPs, which allows deletion of SV40T and hTERT genes by Cre recombinase. Reverted NAKT-15 cells expressed beta cell transcription factors (Isl-1,Pax 6,Nkx 6.1,Pdx-1), prohormone convertases 1/3 and 2, and secretory granule proteins, and secreted insulin in response to glucose, similar to normal human islets. Transplantation of NAKT-15 cells into streptozotocin-induced diabetic SCID mice resulted in perfect control of blood glucose within 2 weeks ; mice remained normoglycemic for longer than 30 weeks. The establishment of a beta cell line is one step toward the potential cure of diabetes by transplantation.

用 UW 溶液解冻冷冻保存的胰岛后，胰岛细胞显示出有效的单层形成，并促进有效的慢病毒介导的转导。通过使用源自 804G 细胞的细胞外基质，有效地实现了小鼠胰岛的单层形成。我们成功地在猪身上建立了糖尿病模型来进行全胰腺切除术。这样的糖尿病猪在手术后10天内就死于酮症酸中毒。该模型将有助于评估糖尿病靶向细胞疗法的功效。目前还没有与原代 β 细胞功能相同的人类胰腺 β 细胞系。我们通过用含有猿病毒 40 大 T 抗原 (SV40T) 和人端粒酶逆转录酶 (hTERT) cDNA 的逆转录病毒载体转染原代人 β 细胞，建立了可逆永生化人 β 细胞克隆 (NAKT-15)，该载体两侧是配对重组靶标 loxPs，允许通过 Cre 删除 SV40T 和 hTERT 基因。重组酶。恢复的 NAKT-15 细胞表达 β 细胞转录因子（Isl-1、Pax 6、Nkx 6.1、Pdx-1）、激素原转化酶 1/3 和 2 以及分泌颗粒蛋白，并响应葡萄糖分泌胰岛素，与正常人胰岛相似。将NAKT-15细胞移植到链脲佐菌素诱导的糖尿病SCID小鼠体内，两周内血糖得到完美控制；小鼠血糖保持正常状态超过 30 周。 β细胞系的建立是通过移植治愈糖尿病的一步。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Maintenance of glucose-sensitive insulin secretion of cryopreserved human islets with University of Wisconsin solution and ascorbic acid-2 glucoside.

使用威斯康星大学溶液和抗坏血酸 2 葡萄糖苷维持冷冻保存的人胰岛的葡萄糖敏感性胰岛素分泌。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Artificial Organs 28(6)
影响因子：
0
作者：
Arata T;Okitsu T;Fukazawa T;Ikeda H;Kobayashi K;Chen Y;Kosaka Y;Narushima M;Matsuoka J;Yamamoto I;Tanaka N;Lakey RT J;Kobayashi N
通讯作者：
Kobayashi N

Establishment of insulin-secreting human cell lines for diabetes-targeted cell therapies.

建立用于糖尿病靶向细胞疗法的胰岛素分泌人类细胞系。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Transplantation Now 18(4)
影响因子：
0
作者：
Kobayashi N;Okitsu T;Chen Y;Yamatsuji T;Shirakawa Y;Inai K;Akasu H;Tanaka N
通讯作者：
Tanaka N

Transduction of human islets with the lentiviral vector.

用慢病毒载体转导人类胰岛。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Transplantation Proceedings 36(7)
影响因子：
0
作者：
Kobayashi N;Okitsu T;Chen Y;Yamatsuji T;Shirakawa Y;Inai K;Akasu H;Tanaka N;Takahashi T.;Kondo N;Naoya Kobayashi
通讯作者：
Naoya Kobayashi

Development of a porcine model of type 1 diabetes by total pancreatectomy and establishment of a glucose tolerance evaluation method