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分子シャトル型ナノファイバー〜ATP依存性プロテアーゼによるリニアモーターの開発

分子穿梭型纳米纤维～利用ATP依赖性蛋白酶开发直线电机

基本信息

批准号：
16750190
负责人：
櫻井敏彦
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Tottori University (2005)Kumamoto University (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16750190/
关键词：
FtsH認識tag seq-ペプチド FtsH ATP トランスロケーション Au(111)

项目摘要

プロテアーゼが有する機構の中でもトランスロケーション機構に着目し,この機構を利用したペプチド輸送システムの構築を試みる。すなわち,リング状オリゴマーであるプロテアーゼを分子シャトルと見立て,トランスロケーションされる基質蛋白質をレールとしたプロテアーゼ型ロタキサン構造を構築することが可能となる。プロテアーゼ型ロタキサン構造の構築を目的として,分子鎖C末端にSsrAタグ配列を有する基質ポリペプチドを調製し,FtsHによるこれらのモデル基質のトランスロケーションを利用したロタキサン構造形成について検討する。具体的には,モデル基質のN末端を基板状に固定化することによりプロテアーゼ型ロタキサン構造を基板上に固定化することを目的とした。本研究では,先年度までに基板上におけるロタキサン型ナノ構造の構築を念頭におき,基質タンパク質の基板上への物理吸着について,AFMを用いて検討した。この結果,以上の結果より,シリコン基板を用いることにより,基質タンパク質の物理吸着を抑えた基板の作成が可能であること,また,Au-S結合を利用したα_s-カゼインの固定が可能であることが示された。この結果を踏まえて,本年度では分子鎖末端にSsrAタグを有するモデルペプチドのシリコン基板上への固定化を試みた。合成したモデルペプチドは,シリコン基板上に分散した状態で固定化することが可能であることが示された。また,この基板上へのプロテアーゼの固定化を目的とした評価では,基板上の基質ペプチドを分解することが示され,固体表面における基質に対してプロテアーゼ活性を有する事が示されたが,プロテアーゼの固定化には至らなかった。今後,基質分子を合成ペプチドから合成高分子に変更し,目的とする超分子構造体の構築を行う必要性が示された。

In the case of the organization, the system is designed to be used for the construction of the system. The structure of the matrix protein can be changed by changing the shape of the matrix. For the purpose of constructing the structure of the molecular lock C terminal, the matrix selection is modulated by the SsrA sequence, and the FtsH sequence is used to form the structure of the molecular lock C terminal. Specifically, the purpose is to immobilize the N-terminal end of the molecular matrix in the shape of a substrate, and to immobilize the prota-type surface structure on a substrate. In this study, the concept of the construction of the substrate structure, the physical adsorption of the substrate structure and the AFM were discussed in the past years. As a result, it is possible to make a substrate by physical adsorption of a matrix material. As a result, this year, we tried to immobilize SsrA on the substrate of molecular lock terminal. The composition of the substrate is not stable. For the purpose of immobilization of the substrate, the matrix on the substrate is decomposed, and the substrate on the solid surface is immobilized. In the future, the synthesis of matrix molecules will be changed from synthetic polymers to supramolecular constructs.