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高度好塩性古細菌キチナーゼの耐塩機構の解明と有機溶媒中での新規オリゴ糖創製

阐明高嗜盐古菌几丁质酶的耐盐机制并在有机溶剂中创建新型寡糖

基本信息

批准号：
16760630
负责人：
八波利恵
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

既にゲノム解析により、高度好塩性古細菌Halobacterium sp. NRC-1株にはキチナーゼホモログをコードする遺伝子が存在することが報告されているが、タンパク質としての実態は明らかにされていない。本研究ではNRC-1株キチナーゼの酵素学的性質、耐塩機構の解明および工学応用を目指した研究を行った。以下1および2に実績の概要を示す。1.Haloarcula japonicaにおけるキチナーゼ遺伝子の発現と組換え型キチナーゼの精製高度好塩性古細菌用キチナーゼ遺伝子発現型プラスミドを構築し、発現型プラスミドを導入したH.japonica形質転換体より、培養上清を回収した。次に限外ろ過濃縮した後、ヒドロキシアパタイト・カラムクロマトグラフィーを行い、組換え型キチナーゼの精製を実施した。その結果、分子質量約70kDaの位置に単一バンドを示す精製標品が得られた。2.組換え型キチナーゼの性質検討組換え型キチナーゼ精製標品用いて、37℃における反応pH依存性およびpH6.0における反応温度依存性を調べた。その結果、本酵素はpH4.5付近に反応の至適を有し、至適温度は55℃であることがわかった。またpH6.0、37℃において、キチナーゼ活性のNaCl濃度依存性を調べたところ、組換え型キチナーゼは1M付近に反応の至適を有することが明らかとなった。.また、NaClが0M付近の活性は最大活性40%程度であり、活性発現に塩を必要とすることがわかった。

In addition, the highly pathogenic archaea Halobacterium sp. NRC-1 strain was analyzed and reported to exist in the field. This study is aimed at studying the enzymatic properties, resistance mechanisms and engineering applications of NRC-1 strain. A summary of the performance of items 1 and 2 below is shown. 1. Haloarcula japonica is a highly refined archaea. It is used to construct and construct the Haloarcula japonica gene development and transformation model. It is used to introduce H.japonica gene transformation model and culture supernatant. The second limit is the concentration of impurities, the concentration of impurities, the concentration, the concentration The results showed that the purified standard was obtained at the position of molecular weight about 70kDa. 2. The pH dependence of the purified standard was adjusted at 37℃ and the temperature dependence was adjusted at pH 6.0. As a result, the enzyme has a pH of 4.5 and an optimum temperature of 55℃. pH 6.0, 37℃, NaCl concentration dependence of activity, composition, reaction, reaction The activity near 0M is about 40% of the maximum activity, and the activity is necessary to produce it.