アクチン細胞骨格の新しい制御蛋白質Nadrinの血小板産生過程における役割の解析

巨核球系細胞株MEG-01をトロンボポエチン(TPO)またはホルボールミリステートアセテート(PMA)で刺激して分化を誘導し、Nadrin各スプライスバリアントの発現量をイムノブロットで調べた。このときGPIIIa特異的抗体を用いたイムノブロットでGPIIIaの発現量を調べ、MEG-01の成熟巨核球様細胞への分化誘導を確認した。TPO、PMAいずれで処理した場合にも4つのNadrinバリアントのうちNadrin104のみ発現が変化せず、Nadrin126、Nadrin116、Nadrin102は刺激開始後24時間から72時間の間に顕著に減少した。オルタナティブスプライシングの違いが検出可能なPCRプライマーを設計し、RT-PCRによる検討を行なったところ、分化刺激に伴いスプライシングのパターンに変化がみられた。この変化はイムノブロットでみられた発現量の変化と矛盾しない。従ってNadrinバリアントの発現量の変化はスプライシングパターンの変化により引き起こされたと考えられる。次にバリアント特異的抗体を用いた細胞染色によりNadrinバリアントの細胞内局在を調べた。分化誘導前のMEG-01ではNadrin104およびNadrin126は細胞質に存在が見られ、Nadrin102とNadrin116は細胞質だけでなく核にも存在することがわかった。これは核画分を調製して行なったイムノブロットによっても確認できた。現在Nadrinの分布が分化誘導に伴って変化するかを、細胞の形態の変化およびGPIIb/IIIaやP-セレクチンなどの分化マーカーの変化とあわせて検討している。

巨核球系細胞株MEG-01をトロンボポエチン(TPO)またはホルボールミリステートアセテート(PMA)で刺激して分化を誘導し、Nadrin各スプライスバリアントの発現量をイムノブロットで調べた。このときGPIIIa特異的抗体を用いたイムノブロットでGPIIIaの発現量を調べ、MEG-01の成熟巨核球様細胞への分化誘導を確認した。TPO、PMAいずれで処理した場合にも4つのNadrinバリアントのうちNadrin104のみ発現が変化せず、Nadrin126、Nadrin116、Nadrin102は刺激開始後24時間から72時間の間に顕著に減少した。オルタナティブスプライシングの違いが検出可能なPCRプライマーを設計し、RT-PCRによる検討を行なったところ、分化刺激に伴いスプライシングのパターンに変化がみられた。この変化はイムノブロットでみられた発現量の変化と矛盾しない。従ってNadrinバリアントの発現量の変化はスプライシングパターンの変化により引き起こされたと考えられる。次にバリアント特異的抗体を用いた細胞染色によりNadrinバリアントの細胞内局在を調べた。分化誘導前のMEG-01ではNadrin104およびNadrin126は細胞質に存在が見られ、Nadrin102とNadrin116は細胞質だけでなく核にも存在することがわかった。これは核画分を調製して行なったイムノブロットによっても確認できた。現在Nadrinの分布が分化誘導に伴って変化するかを、細胞の形態の変化およびGPIIb/IIIaやP-セレクチンなどの分化マーカーの変化とあわせて検討している。