アクチン細胞骨格の新しい制御蛋白質Nadrinの血小板産生過程における役割の解析

肌动蛋白细胞骨架的新型调节蛋白Nadrin在血小板生成过程中的作用分析

• 批准号: 16790063
• 负责人: 原田 史子
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790063/
• 关键词: アクチン細胞骨格; 血小板; 巨核球; RhoGAP

巨核球系細胞株MEG-01をトロンボポエチン(TPO)またはホルボールミリステートアセテート(PMA)で刺激して分化を誘導し、Nadrin各スプライスバリアントの発現量をイムノブロットで調べた。このときGPIIIa特異的抗体を用いたイムノブロットでGPIIIaの発現量を調べ、MEG-01の成熟巨核球様細胞への分化誘導を確認した。TPO、PMAいずれで処理した場合にも4つのNadrinバリアントのうちNadrin104のみ発現が変化せず、Nadrin126、Nadrin116、Nadrin102は刺激開始後24時間から72時間の間に顕著に減少した。オルタナティブスプライシングの違いが検出可能なPCRプライマーを設計し、RT-PCRによる検討を行なったところ、分化刺激に伴いスプライシングのパターンに変化がみられた。この変化はイムノブロットでみられた発現量の変化と矛盾しない。従ってNadrinバリアントの発現量の変化はスプライシングパターンの変化により引き起こされたと考えられる。次にバリアント特異的抗体を用いた細胞染色によりNadrinバリアントの細胞内局在を調べた。分化誘導前のMEG-01ではNadrin104およびNadrin126は細胞質に存在が見られ、Nadrin102とNadrin116は細胞質だけでなく核にも存在することがわかった。これは核画分を調製して行なったイムノブロットによっても確認できた。現在Nadrinの分布が分化誘導に伴って変化するかを、細胞の形態の変化およびGPIIb/IIIaやP-セレクチンなどの分化マーカーの変化とあわせて検討している。

MEG-01 cell line is a megakaryocytic cell line that is stimulated by TPO (TPO), induced by differentiation, and regulated by Nadrin (PMA). The expression of GPIIIa was modulated by GPIIIa-specific antibodies, and the differentiation of MEG-01 mature megakaryocytes was confirmed. TPO, PMA, Nadrin104, Nadrin 126, Nadrin116, Nadrin 102, Nadrin104, Nadrin126, Nadrin 102, Nadrin102, Nadrin 124, Nadrin 126, Nadrin102, Nadrin102, Nadrin 126 The possibility of detecting violations in the OARTANATIS platform has been explored. PCR platform design and RT-PCR discussions are being carried out, and differentiation stimulation is accompanied by changes in the parameters of the OARTANATIS platform. This is a contradiction in terms of the amount of change that occurs. The change of Nadrin's occurrence amount is the change of Nadrin's occurrence amount, which is the change of Nadrin's occurrence amount. The cell staining and the intracellular regulation of Nadrin were performed by using specific antibodies. Before induction of differentiation, MEG-01 had Nadrin104 and Nadrin126 in the cytoplasm, and Nadrin102 and Nadrin116 in the nucleus. This is the first time that I've ever been able to do this. Now Nadrin distribution is induced by differentiation, cell morphology and GPIIb/IIIa, and cell differentiation is induced by differentiation.