前立腺癌標的自殺遺伝子治療のための葉酸修飾脂質微粒子ベクターシステムの開発

用于前列腺癌靶向自杀基因治疗的叶酸修饰脂质微粒载体系统的开发

基本信息

批准号：
16790113
负责人：
服部喜之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

多くの癌細胞においては、葉酸受容体が過剰発現し、葉酸の取り込みが高いことが報告されている。昨年度、3級アミンを有する正電荷コレステロール脂質3([N-(N',N'-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol(DC-Chol)を主成分とした葉酸修飾脂質微粒子遺伝子ベクターを調製し、葉酸受容体を過剰発現している癌細胞へ選択的に遺伝子導入できることを明らかにした。今年度は、さらに癌細胞での高い遺伝子発現を誘導するために、2級アミンを有する正電荷コレステロール脂質cholesteryl-3β-carboxyamidoethylene-N-hydroxylamine(OH-Chol)を用いて葉酸修飾微粒子遺伝子ベクターを調製し、癌細胞への遺伝子導入効率を評価した。そして、OH-Cholを用いて調製した遺伝子ベクターは、前立腺癌細胞にDC-Cholを用いたものより10倍以上高い遺伝子導入効率を示すことを見出した。また前立腺癌特異的に遺伝子発現を誘導させる治療用遺伝子を調製するために、前立腺癌患者から抽出したRNAサンプルを用いて、前立腺癌特異的に発現する遺伝子を検索したところ、ミッドカイン(Mk)や前立腺特異的膜抗原(PSMA)の高い遺伝子発現が定量PCR法により確認できた。そこで、MkやPSMAのプロモーター配列の下流にヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ(HSV-tk)遺伝子を挿入した治療用遺伝子を調製した。そして前立腺癌培養細胞(LNCaP、PC-3細胞)及び担癌マウスに、葉酸修飾脂質微粒子ベクターを用いて治療用遺伝子を送達させ、自殺遺伝子治療を行ったところ、前立腺癌特異的に高い細胞死を誘導させることが出来た。前立腺癌特異的プロモーターを利用した治療用遺伝子と葉酸修飾脂質微粒子遺伝子ベクターを用いた前立腺癌治療により、選択的且つ高効率に癌細胞を死滅させることに成功した。

据报道，叶酸受体在许多癌细胞中都过表达，并且叶酸摄取量很高。去年，我们准备了一个主要由带正电的胆固醇脂质组成的叶酸修饰的脂质微粒基因基因载体3（[N-（N'，N'，N'，N'-二甲基氨基乙烷）-Carbamoyl] - carbamoyl]胆固醇（DC-chol），这些胆固醇（DC-chol）含有过度转移的细胞，以使其转移到癌症中，以至于可以转移到癌症中，以至于又可以转化为癌症。二次胺在癌细胞中诱导高基因表达。前列腺癌细胞的效率比使用DC-Chol的效率。前列腺特异性膜抗原（PSMA）可以通过定量PCR确认。因此，将治疗状态插入了MK和PSMA启动子序列下游的疱疹病毒衍生的胸苷激酶（HSV-TK）。制备了基因。然后，使用叶酸修饰的脂质微粒子载体将培养的前列腺癌细胞（LNCAP，PC-3细胞）和耐肿瘤小鼠递送至治疗基因，并进行了自杀基因治疗，并诱导了高细胞死亡，以特异性诱导前列腺癌。通过使用前列腺癌特异性启动子和叶酸修饰的脂质微粒基因载体治疗前列腺癌，通过使用治疗基因治疗前列腺癌，成功地有效地杀死了癌细胞。