デコイ核酸による炎症性疾患治療用炎症標的遺伝子ベクターの開発

利用诱饵核酸开发用于治疗炎症疾病的炎症靶基因载体

基本信息

批准号：
18790691
负责人：
服部喜之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

リウマチ疾患においては、炎症部位において集積した活性化マクロファージから炎症性サイトカインが産生・分泌され、炎症が持続すると考えられる。炎症性サイトカインの発現には、転写因子であるNFκBが重要な役割をしており、炎症性サイトカインの発現を誘導する転写因子として働く。NFκBデコイ核酸は、NFκBと特異的に結合するオリゴDNAで、特異的にNFκBと結合して転写阻害作用を持つ。昨年度、葉酸修飾した非ウイルス性の炎症標的遺伝子ベクター(葉酸修飾ナノ粒子)を開発した。そして、NFκBデコイ核酸を活性化マクロファージに、葉酸受容体を介して選択的に導入できることを明らかにしている。今年度は、葉酸修飾ナノ粒子による抗炎症効果と安全性をin vitro及びin vivoで評価することを試みた。葉酸修飾ナノ粒子よりNFκBデコイ核酸を導入したマクロファージRAW264.7細胞では、核内へのNFκB移行を阻害できた。さらに、マクロファージ培養細胞を用いて葉酸修飾ナノ粒子の細胞毒性を評価したところ、葉酸修飾ナノ粒子は細胞毒性をほとんど示さなかった。in vivoでの評価のため、炎症性疾患モデル動物としてアジュバント誘導炎症モデルマウス(関節リウマチモデル)を作製し、葉酸修飾ナノ粒子を用いてNFκBデコイ核酸を患部に投与し、抗炎症作用を観察することを試みた。アジュバントにより誘導されたマウスの炎症部位をMRIで撮像し、治療効果の評価を行ったが、炎症部位をMRIで明確に判断することは難しく、明確な治療評価のためには血液中のTNF-αなどの炎症性マーカーの濃度測定が必要であると考えられた。

在风湿性疾病中，炎症细胞因子是由在炎症部位积累的活化巨噬细胞产生和分泌的，导致持续性炎症。转录因子NFκB在炎症细胞因子的表达中起重要作用，并作为诱导炎症细胞因子表达的转录因子。 NFκB诱饵核酸是特异性结合NFκB的寡核酸，并特别结合了NFκB并具有转录抑制作用。去年，我们开发了一种已用叶酸修饰的非病毒炎症靶基因载体（叶酸修饰的纳米颗粒）。还显示，可以通过叶酸受体选择性地将NFκB诱饵核酸选择性地引入活化的巨噬细胞中。今年，我们试图评估体外和体内叶酸改性纳米颗粒的抗炎作用和安全性。巨噬细胞RAW264.7用NFκB诱饵核酸从叶酸修饰的纳米颗粒引入的细胞能够抑制NFκB转移到核中。此外，当使用巨噬细胞培养的细胞评估叶酸修饰的纳米颗粒的细胞毒性时，叶酸酸化的纳米颗粒几乎没有细胞毒性。对于体内评估，辅助诱导的炎症模型小鼠（类风湿关节炎模型）作为炎症性疾病的动物模型制备，并使用叶酸酸性纳米颗粒将NFκB诱饵核酸给予对受影响的区域，以模仿抗炎症效应。通过MRI成像，对辅助诱导的小鼠的炎症部位进行了成像，并评估了治疗效果。但是，很难清楚地使用MRI确定炎症部位，并且人们认为，对于清晰的治疗评估，必须测量血液中TNF-α等炎症标记的浓度。