活性酸素種による活性化されるイオンチャネル群の生理的意義解明

阐明活性氧激活离子通道的生理意义

基本信息

批准号：
16790164
负责人：
原雄二
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790164/
关键词：
TRPチャネル活性酵素種カルシウムイオン EFHC1 eNOS 細胞死

项目摘要

活性酸素種は生体内で様々な応答を引き起こす。形質膜越えのCa2+流入もその一つであるが、その分子実体については明らかにされていなかった。私はこれまでに活性酸素種により活性化されるチャネルとして、TRPM2,TRPC5の同定に成功した。本申請ではそれらの活性化機構及び生理的意義の解明を第一義としてきた。(活性化機構解明)チャネル結合蛋白質の同定を免疫沈降法にて試みたところ、TRPM2チャネルにはEFHC1蛋白質、TRPC5にはeNOS(endothelial NO synthase)蛋白質の同定に成功した。これらの蛋白質が結合することにより、TRPM2、TRPC5チャネル活性がそれぞれ増強されること、さらにeNOSに関してはNO産生活性も増加することを見出した。(投稿準備中)。また、EFHC1蛋白質は若年性てんかん症の原因遺伝子であり、R-type電位依存性Caチャネルとの結合が見られR-type電流が増強することにより神経細胞死が見られること、さらにEFHC1点変異によりR-type依存的な細胞死が抑制されることを明らかにした(Nat.Genet,36,842-846(2004))。(生理的意義解明)TRPM2、TRPC5遺伝子欠損マウスの作製を試みた。これまでにTRPM2遺伝子欠損マウスの解析を中心に行っており、免疫系細胞、特に単球などでのサイトカイン産生、好中球の遊走能減弱が見られた。TRPC5遺伝子欠損マウスはCre-loxPシステムを用いて現在作製中である。

活性氧在体内引起多种反应。其中之一是整个质膜的Ca2+涌入，但尚未揭示分子实体。我成功地将TRPM2和TRPC5鉴定为被动氧激活的通道。该应用主要集中于阐明其激活机制和生理意义。（激活机制的末端）试图使用免疫沉淀鉴定通道结合蛋白时，我们成功地鉴定了TRPM2通道和eNOS（内皮NO合酶）蛋白的EFHC1蛋白的EFHC1蛋白。发现这些蛋白质的结合增强了TRPM2和TRPC5通道的活性，并且在eNOS中，没有生产也会增加。（正在进行的后准备工作）。此外，EFHC1蛋白是幼年癫痫的致病基因，发现在增强R型电流时，观察到与R型电压依赖性CA通道和神经元细胞死亡的结合时，当EFHC1点增强时，EFHC1突变抑制了R-type Pype Pype抑制R-TYPE CellENT CellED celleent Etipent celleT依赖于2004 nAt 36，362-- 362-- 36.3。（生理意义的结尾）我们试图创建缺乏TRPM2和TRPC5基因的小鼠。到目前为止，我们一直专注于分析缺乏TRPM2基因的小鼠，并在免疫系统细胞（尤其是单核细胞）中看到细胞因子的产生，以及中性粒细胞的迁移能力减弱。目前，正在使用CRE-LoxP系统生产TRPC5基因缺陷小鼠。