权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ミトコンドリアDNAの組換え修復酵素の探索

寻找线粒体 DNA 的重组修复酶

基本信息

批准号：
16790190
负责人：
福應温
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の成果および明らかになった事を以下に記す。1.組換え後期過程の試験管内再構成系とヒトミトコンドリア抽出液の分画・精製(1)組み換え中間体のモデル基質であるα-Structureと4way junctionの2種のDNAを作成。(2)ヒト胎盤から得た高純度のミトコンドリア抽出液を調製した。(3)ミトコンドリア抽出液に強いヌクレアーゼ活性を認めた。2.高感度質量分析システムの構築本研究の遂行を目的として微量分析用のLC-MSシステムによるミトコンドリア内のタンパク質同システムを構築した。免疫沈降やクロマトグラフィーなどで分画したミトコンドリア抽出画分をSDS-PAGEで分離し、そのゲル片からタンパク質を高感度で検出するシステムを構築した。3.新規ミトコンドリアタンパクの同定と解析(1)ミトコンドリアDNAの核様体構造(nucleoid)の主要タンパク質であるTFAMに対する抗体を用いた免疫沈降法によりnucleoidにクロスリンクするミトコンドリアタンパク質を同定した。その結果mtSSB、HSP60、Lon proteaseなどのミトコンドリアに局在することが知られている分子とともに、核のDNA polymeraseδのサブユニットと考えられていたPDIP38が同定された。(2)PDIP38の局在を詳細に調べ、ミトコンドリアマトリクスに存在することを明らかにした。(3)PDIP38がmtSSB、TFAMと直接相互作用することを免疫沈降法により明らかにした。(4)PDIP38がミトコンドリアDNA polymeraseγと相互作用しないことがわかった。(5)表面プラズモン共鳴によりPDIP38など同定された分子のDNA結合能を検討したところ、1本鎖DNA、2本鎖DNAに対する有意な結合は見られなかった。一方、ヒトHSP60が1本鎖DNAに結合することが明らかになった。

The results of this study are listed below. 1. In the later stage of the transformation, the recombination system in the test tube is composed of two kinds of DNA: (1) the α-Structure and 4-way junction of the intermediate of the transformation. (2)The extract was prepared with a high purity solvent. (3)The extraction solution is highly reactive. 2. Construction of high sensitivity mass spectrometry system The purpose of this study is to construct a mass spectrometry system for microanalysis. Immuno-precipitation analysis SDS-PAGE separation and high sensitivity analysis 3. The identification and analysis of the new nucleotide sequence (1) The identification and analysis of the nucleotide sequence (2) The identification and analysis of the nucleotide sequence (1) The identification and analysis of the antibody ( The results of mtSSB, HSP60, Lon protease and PDIP38 were analyzed. (2)PDIP38 has a detailed adjustment and a clear indication of its existence. (3) PDIP38 mtSSB, TFAM and direct interaction between them. (4)PDIP38 is a DNA polymeraseγ-phase interaction. (5)The surface resonance of PDIP38 and the DNA binding energy of the same molecule are discussed in detail. One side, HSP60, one lock DNA, one lock DNA, one lock DNA.