MGB技術を用いた造血器腫瘍における微小残存病変定量法の開発

开发利用 MGB 技术量化造血肿瘤微小残留病灶的方法

• 批准号: 16790212
• 负责人: 阿保 亜紀子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790212/
• 关键词: ALL; NHL; MRD; MGB-ASO RQ-PCR assay; 免疫受容体遺伝子; 蛍光プローブ; IgH; MGB-ASO RO-PCR assay; IgL

(目的)我々は,造血器腫瘍において免疫受容体遺伝子の多様性を利用した,allele-specific oligonucleotide rea1-time quantitative PCR(ASO RQ-PCR)法によるMRDの定量的法を開発・実践してきた.本法では,多様な免疫受容体遺伝子の共通領域にconsensusprobeを設定することで,蛍光プローブの大幅なコストダウンに成功し,検査室レベルでの臨床応用を可能にした.しかし,(1)N-reionが数塩基と短い場合には偽性が生じる,(2)NHLではプローブの。に生じたmutationのためにconsensus probeを使えない場合がある,などの欠点があった.これらの理由で解析不可能な症例は,小児ALLで10%,悪性リンパ腫で30-40%であった.そこで当該研究課題では,これらの問題を解決するために,最近開発されたMBG(minor groove binder)技術を応用したプローブ・プライマーを用いることにした.(結果)1.ALL 114例の初診時骨髄単核球からDNAを抽出し,114中74例(64.9%)でIgH遺伝子を増幅し得た,B-NHL24例の初診断時リンパ節からDNAを抽出し,24例中14例(58.3%)でIgH遺伝子を増幅し得た.クローニングシークエンスを行い,塩基配列を決定した.2.データベースより10本のMGB-VHプローブを作製した.3.ALL 24例中5例はN-regionが数塩基と短かったことから従来のVHプローブ(21-27mer)が使用できなかったが,全例でMGB-VHプローブ(16-18mer)を使用し,RQ-PCR assayが可能となった(MGB-VHプローブ可能例100%vsVHプローブ可能例79%).4.B-NHL14例中4例ではプローブの領域に生じたmutationのために従来のVHプローブが使用できなかったが,9例でMGB-VHプローブを使用しRQ-PCR assayが可能となった(MGB-VHプローブ可能例64%vsVHプローブ可能例35%).5.MGB-VHプローブを作成したALL 24中18例およびB-NHL9例について治療後Day 15,Day 35,Day 100における骨髄から単核球からDNAを抽出し,従来法のASO RQ-PCR assayおよびMGB-ASO RQ-PCR assayを用いてMRDを比較した.6.ALL, B-NHLともにASO RQ-PCR assayおよびMGB-ASO RQ-PCR assayにおけるMRD値はほぼ同等であった.7.ALLにおいてはDay 15,Day 35,Day 100におけるMRDの陽性群,陰性群では無病生存率に有意な差がみられなかった.8.ALLにおいてはDay 15のMRD残存率(Day 15 MRDコピー数/Day 0 MRDコピー数×100)が1%以上群は1%未満群に比して有意に無病生存率が低いことが示された(74.7%vs100%).(考察)MBG技術を応用したMRD定量化システムは従来法のASORQ-PCR assayが不能であった症例もRQ-PCR1 assayが可能となり,効率的な臨床応用が可能であると考えられた.ALLにおいてはDay 15におけるMRD残存率を測定することで予後を予測可能であることが示された。

Objective: To develop and implement an allele-specific oligonucleotide rea1-time quantitative PCR(ASO RQ-PCR) method for quantitative detection of MRD in hematopoietic tumors. This method is aimed at setting up a consensusprobe in the common domain of multiple immune receptor genes, and successfully identifying the broad spectrum of immune receptor genes, which may be used in clinical trials. (1)N-reion,(2)NHL,(3)N-reion,(4)N-reion,(5) NHL,(6) NHL,(7) NHL,(8) NHL,(9) NHL,(9) NHL,(10) NHL,(11) NHL,(11) NHL,(12)NHL,(13) NHL,(14) NHL,(15) NHL,(16) NHL,(17) NHL,(18) NHL,(19), NHL,(19), NHL, NHL A consensus probe is used to detect the mutation. The reason for this is that it is impossible to analyze the symptoms. The small child ALL is 10%, and the sex is 30-40%. The research topic is to solve the problem of MBG(minor groove binder) technology. (Results) 1. DNA was extracted from bone marrow of 114 ALL patients at initial diagnosis, 74 of 114 (64.9%) had increased IgH gene expression, 24 of 24 B-NHL patients had increased IgH gene expression at initial diagnosis, 14 of 24 (58.3%) had increased IgH gene expression. 2. To determine the base arrangement of the MGB-VH list, 10 of the MGB-VH list is controlled. 3. All of the 24 cases, 5 of the 24 cases, are N-region, N-region, N-region and N-region.(21-27mer)(16-18mer) Use,RQ-PCR assay is possible (100% vs. 79%).4.B-NHL 4 out of 14 cases were found in the field where mutation occurred. 9 Cases of MGB-VH and RQ-PCR Assay (64% vs. 35%).5.MGB-VH Prologue made in ALL 24 cases 18 cases B-NHL9 cases Post-treatment Day 15,Day 35,Day 100 ASO RQ-PCR assay and MGB-ASO RQ-PCR assay are used in MRD comparison. 6.All, B-NHL and ASO RQ-PCR assay and MGB-ASO RQ-PCR assay are used in MRD value comparison. 7.All and MGB-ASO RQ-PCR assay are used in MRD positive group on Day 15,Day 35 and Day 100. 8. MRD survival rate on Day 15 (MRD number on Day 15/MRD number on Day 0 ×100) was higher than that in the negative group (74.7% vs 100%). (Investigation)MBG technology can be used for MRD quantification. ASORQ-PCR assay can not be used for RQ-PCR1 assay. Clinical application of MBG technology can be used for MRD survival rate measurement on Day 15.

项目成果

Short consensus probes with 3′-minor groove binder of the immunoglobulin heavy-chain gene for real-time quantitative PCR in B-cell non-Hodgkin lymphomas

• DOI: 10.1038/labinvest.3700092
• 发表时间: 2004-07-01
• 期刊: LABORATORY INVESTIGATION
• 影响因子: 5
• 作者: Uchiyama, M;Maesawa, C;Masuda, T
• 通讯作者: Masuda, T

Distinguishing between proliferating nodal lymphoid blasts in chronic myelogenous leukaemia and non-Hodgin lymphoma : A report of three cases and detection of a bcr/abl fusion signal by single cell analysis.

慢性粒细胞白血病和非霍金淋巴瘤中增殖性淋巴结淋巴母细胞的区别：三例报告以及通过单细胞分析检测 bcr/abl 融合信号。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Pathol Int. 55
• 作者: Yashima-Abo A;Satoh T;Abo T;Aoki Y;Kowata S;Ito S;Ishida Y;Funiiwara H;Maesawa C;Masuda T.
• 通讯作者: Masuda T.

Aberrant maspin expression in gallbladder epithelium is associated with intestinal metaplasia in patients with cholelithiasis.

胆囊上皮中异常的 maspin 表达与胆石症患者的肠化生有关。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J Clin Pathol 59(3)
• 作者: Maesawa C;Ogasawara S;Yashima-Abo A;Kimura T;Kotani K;Masuda S;Nagata Y;Iwaya T;Suzuki K;Oyake T;Akiyama Y;Kawamura H;Masuda T.
• 通讯作者: Masuda T.

Consensus JH gene probes with conjugated 3'-minor groove binder for monitoring minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia.

具有缀合 3-小沟结合物的共有 JH 基因探针，用于监测急性淋巴细胞白血病的微小残留病。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J Mol Diagn 7
• 作者: Uchiyama M;Maesawa C;Yashima-Abo A;Tarusawa M;Endo M;Sugawara W;Chida S;Onodera S;Tsukushi Y;Ishida Y;Tsuchiya S;Masuda T.
• 通讯作者: Masuda T.