シアン耐性キノール酸化酵素を標的とした新規抗クリプトスポリジウム薬開発

开发一种新型抗隐孢子虫药物，靶向抗氰对苯二酚氧化酶

基本信息

批准号：
16790247
负责人：
鈴木高史
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790247/
关键词：
クリプトスポリジウム原虫シアン耐性呼吸マウスアスコフラノン抗生物質クリプトスポリジウム症感染症酵素薬剤反応性培養シアン耐性キノール酸化酵素 alternative oxidase オーシスト直接蛍光抗体法抗酸染色法

项目摘要

本研究は申請者が治療薬の存在しないクリプトスポリジウム症の病因原虫C.parvumのゲノム上にalternative oxidase(CpAOX)遺伝子の存在を見出し、その組み替えタンパク質に実際に酸化酵素活性を確認したことを背景として、CpAOXに対する特異的阻害剤アスコフラノンによる新規化学療法の可能性を探索するのが本研究の目的である。さらにゲノムプロジェクトの進展により本原虫のゲノム上には活性を持つ他の酸化酵素は存在しないと推定された。従って、他の酸化経路を考慮する必要はないと考えられた。そこで阻害剤アスコフラノンにより、原虫の生育を阻害できるか以下の検討を昨年度までのin vitro培養細胞を用いた解析に加えて最終年度である本年度は動物実験として感染マウスの治療実験を中心に行った。動物実験のモデルとして、SCIDマウスを用い、C.parvumオーシスト10^6を感染させ、糞便中にオーシストを確認後、100mg/kgのアスコフラノンを経口的に3日連続投与を行った結果、投与開始8-10日後に4匹のマウス全てがオーシスト陰性になった。その後の経過で1匹はオーシスト排出が再発したが、残りの3匹は60日後まで陰性であり、治癒されたと判断された。これらをさらに詳細に解析を行うと糞便中のオーシスト濃度がグラムあたり10^5を越えるものは再現性よくオーシストの排出を続けることが明らかになった。逆にオーシストの量がそれ以下の場合はアスコフラノン単独でクリプトスポリジウム症の治療を行いうることが明らかになった。従って、治療薬のない本症に対してアスコフラノンが効果的な薬剤である可能性が大きく示されたが、実際にヒトの治療の際にどのような用量、用法で効果があるのかアスコフラノンの体内動態解析とより定量PCR法の改良等により、定量性のある方法でオーシスト量を判定する方法の開発を進めていくことが実用に向けての課題と考えられる。

这项研究的目的是使用CPAOX抗呋喃酮的特异性抑制剂探索新的化学疗法的可能性，申请人在C. parvum的基因组上发现了替代氧化酶（CPAOX）基因，这是一种原生动物的致病性寄生虫，该寄生虫没有治疗剂，并确认了氧化酶活性，并确认了氧化酶的活性。此外，由于基因组项目的发展，据估计，原生动物的基因组上不存在其他活性氧化酶。因此，不认为需要考虑其他氧化途径。因此，进行了以下研究，以确定抑制剂腹呋喃酮是否可以抑制原生动物的生长，直到去年，除了使用培养的体外细胞进行分析外，直到去年，在今年的最后一年，我们专注于将感染的小鼠作为动物实验。作为动物实验的模型，使用SCID小鼠感染C. parvum卵囊10^6，在确认粪便中的卵囊后，用100 mg/kg口服的卵泡剂连续三天，所有四只小鼠均为8-10天的负卵囊启动后8-10天。在随后的过程中，其中一只动物重复出现卵囊排泄，但是剩下的三只动物直到60天后为阴性，并确定已治愈它们。对这些结果的进一步详细分析表明，如果粪便中的卵囊浓度超过每克10^5，则卵囊继续以可重复的可重复性排泄。相反，已经发现，如果卵囊的量少于卵囊，则仅可用于治疗隐孢子虫。因此，已经表明，没有治疗剂是该疾病的一种有效药物，但是开发以定量方式确定卵囊的方法是一个实际的挑战，例如通过分析对腹腔外素酮的生理动力学和改进定量PCR的方法来确定量量的数量 - ociitation的数量 - 腹呋喃酮和改进定量PCR方法，以确定哪些剂量和方法实际上在人类治疗中有效。

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Alternative oxidase (AOX) genes of African trypanosomes : phylogeny and evolution of AOX and plastid terminal oxidase (PTOX) families.

非洲锥虫的替代氧化酶（AOX）基因：AOX和质体末端氧化酶（PTOX）家族的系统发育和进化。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J Eukaryot Microbiol 52(4)
影响因子：
0
作者：
Suzuki T;Hashimoto T;Yabu Y;Majiwa A OP;Ohshima S;Suzuki M;Lu S;Kido Y;Sakamoto K;Kita K;Ohta N.
通讯作者：
Ohta N.

Establishment of Schistosoma japonicum calpain-specific mouse T cell hybridomas and identification of a T cell epitope that stimulates IFNgamma production.

日本血吸虫钙蛋白酶特异性小鼠 T 细胞杂交瘤的建立以及刺激 IFNγ 产生的 T 细胞表位的鉴定。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Vaccine 23(21)
影响因子：
0
作者：
Osada Y;Kumagai T;Hato M;Suzuki T;El-Malky M;Asahi H;Kanazawa T;Ohta N.
通讯作者：
Ohta N.

Direct evidence for cyanide insensitive quinol oxidase (alternative oxidase) in apicomplexan parasite Cryptosporidium parvum : Phylogenetic and Therapeutic Implication.

顶复门寄生虫小隐孢子虫中氰化物不敏感的喹啉氧化酶（替代氧化酶）的直接证据：系统发育和治疗意义。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biochem.Biophys.Res.Commun 313
影响因子：
0
作者：
Suzuki;T.;Hashimoto;T.;Yabu;Y.;Kido;Y.;Sakamoto;K.;Nihei;C.;Hato;M.;Suzuki;S.;Amano;Y.;Nagai;K.;Hosokawa;T.;Minagawa;N.;Ohta;N.;Kita;K.
通讯作者：
K.

Molecular cloning and characterization of Trypanosoma vivax alternative oxidase (AOX) gene, a target of the trypanocide ascofuranone of cercariae.

间日锥虫替代氧化酶 (AOX) 基因的分子克隆和表征，该基因是尾蚴杀锥虫剂壳孢呋喃酮的靶标。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Parasitol.Int. 53
影响因子：
0
作者：
Suzuki;T.;Nihei;C.;Yabu;Y.;Hashimoto;T.;Suzuki;M.;Yoshida;A.;Nagai;K.;Hosokawa;T.;Minagawa;N.;Suzuki;S.;Kita;K.;Ohta;N.
通讯作者：
N.

An approach for detection of Escherichia coli by the PCR Technique.

一种通过 PCR 技术检测大肠杆菌的方法。