疾病媒介蚊のピレスロイド抵抗性に関与するNa+チャネル変異の新規解析システム構築

本研究の目的は疾病媒介蚊の電位感受性Na+チャンネル（VSSC)分子のプロファイルをin vitro培養細胞で解析可能なシステムを作製し、これ用いてNa+チャンネル分子の各種変異導入によるピレスロイド剤に対する感受性変化と、同変異を有する蚊のピレスロイド剤への抵抗性変化との比較・相関解析を行うことにより、蚊を用いない簡便かつ迅速な新規in vitro殺虫成分スクリーニングシステムの基盤確立を行うことである。本年度はCHO-K1細胞にattP-attBのシステムでゲノム上に効率的に導入するシステムを構築した。CHO-K1細胞に導入したVSSC分子の発現量をモニターするためにVSSC分子に対するペプチド抗体作製を行ったが、本抗体の特異性に問題があり、解析を進めることができなかった。そこで新たにPA-tag融合VSSC分子発現系の作製を行った。その結果、抗PA-tag抗体で発現量のモニターを行う事が可能となった。ベトナムNyah Tran採集のネッタイシマカコロニーより、L982W100％ホモ系、F1534C100％ホモ系統、それぞれのヘテロ系統の作製を行った。

本研究の目的は疾病媒介蚊の電位感受性Na+チャンネル（VSSC)分子のプロファイルをin vitro培養細胞で解析可能なシステムを作製し、これ用いてNa+チャンネル分子の各種変異導入によるピレスロイド剤に対する感受性変化と、同変異を有する蚊のピレスロイド剤への抵抗性変化との比較・相関解析を行うことにより、蚊を用いない簡便かつ迅速な新規in vitro殺虫成分スクリーニングシステムの基盤確立を行うことである。本年度はCHO-K1細胞にattP-attBのシステムでゲノム上に効率的に導入するシステムを構築した。CHO-K1細胞に導入したVSSC分子の発現量をモニターするためにVSSC分子に対するペプチド抗体作製を行ったが、本抗体の特異性に問題があり、解析を進めることができなかった。そこで新たにPA-tag融合VSSC分子発現系の作製を行った。その結果、抗PA-tag抗体で発現量のモニターを行う事が可能となった。ベトナムNyah Tran採集のネッタイシマカコロニーより、L982W100％ホモ系、F1534C100％ホモ系統、それぞれのヘテロ系統の作製を行った。