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赤痢菌の上皮細胞感染におけるオートファジー阻害機構の解析

志贺菌上皮细胞感染自噬抑制机制分析

基本信息

批准号：
16790253
负责人：
小川道永
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790253/
关键词：
赤痢菌オートファジー阻害機構認識機構 IcsB VirG Atg5

项目摘要

本研究課題の研究成果より赤痢菌のiscB遺伝子欠損株(ΔicsB)は上皮細胞に侵入後オートファゴソームによる貪食を高頻度に受けることが明らかになった。さらに、オートファゴソームの「種(たね)」であるGFP-Atg5を発現させたBHK細胞にΔicsBを感染させたところ、菌体の一極へのAtg5の局在が観察されたことから、赤痢菌の一極に局在することが報告されているVirGとAtg5の結合性の解析を行った。その結果、VirGとAtg5の結合が認められ、さらにIcsBがVirGとAtg5の結合を競合的に阻害することが明らかになった。VirGによるオートファジー誘導能を検討するために、virG遺伝子変異株(ΔvirG)をMDCK細胞に感染させた結果ΔvirGではオートファジーが完全に抑制されることが明らかになった。これらの結果から、赤痢菌感染において観察されるオートファジーは赤痢菌の細胞内でのアクチンコメットの形成に必須であるVirGが宿主細胞のオートファジーに必須のタンパク質であるAtg5により認識されることにより誘導され、これはIcsBによって競合的に阻害されることが明らかになった。これらの研究成果をふまえAtg5に結合する宿主タンパク質の検索をyeast two-hybrid法により行った結果、Atg5と相互作用する5種類の候補タンパク質を得た。各々の候補タンパク質についてin vitroおよびin vivoでのAtg5との結合性、および赤痢菌感染によって観察されるオートファゴソームとの局在性の検討をおこなった。その結果4種類の候補タンパク質がin vitroにおいてAtg5と結合性を示し、最終的に1種類の候補タンパク質(AfpIと命名)が赤痢菌感染時に観察されるオートファゴソームと共局在することが明らかになった。

The results of this research project show that the iscB gene of red bacteria is deficient in cells (ΔicsB), and the gluttony is highly frequent after invasion into epithelial cells. In this paper, the development of VirG and Atg 5 in BHK cells was studied. As a result, the combination of VirG and Atg5 is recognized, and the combination of IcsB and VirG and Atg5 is blocked. VirG is the first to induce infection in MDCK cells. VirG is the first to induce infection in MDCK cells. The result of this study is that VirG is necessary for the formation of intracellular pathogens in Salmonella infection. VirG is necessary for the formation of intracellular pathogens in host cells. VirG is also necessary for the induction of intracellular pathogens. VirG is also necessary for the formation of intracellular pathogens in Salmonella infection. VirG is also necessary for the formation of intracellular pathogens in host cells. The results of this research are shown in Atg5. The host and quality search results are obtained by the two-hybrid method. The Atg 5 and interaction results are shown in Atg5. The candidate quality search results are shown in Atg5. Each candidate has the same quality in vitro and in vivo as Atg5, which is associated with the disease. The results showed that 4 kinds of candidate substances were in vitro, 5 kinds of candidate substances were in association, and 1 kind of candidate substances were in association with each other.