病原性真菌カンジダ酵母の糖鎖合成に関わる遺伝子群の病原性への関与についての研究

糖链合成相关基因在致病真菌念珠菌发病机制中的研究

• 批准号: 16790263
• 负责人: 中山 浩伸
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Suzuka National College of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790263/
• 关键词: 病原性真菌; Candida glabrata; GDP-マンノース合成; PSA1; SRB1; VIG9; paralogue; 環境応答; DPM1; ALG1; PMI40; in vivo-in vitro gap; 機能相補; グルコースリプッレション

糖鎖合成の原料となるGDP-マンノースの合成に関わる遺伝子について,Candida glabrataおよびC.albicansを用いて以下の3点を明らかにした.1.C.glabrataにおいて,GDP-マンノース合成経路の位置する酵素(PMM1:mannose phosphomutase, ALG1:mannosyl transferase, DPM1:,Dolicol-phosphate mannose synthase, YRG4:GDP-mannose transporter)のプロモーターをテトラサイクリン応答性プロモーターに置換した変異株を作製した.テトラサイクリンの誘導体であるドキシサイクリンを加え,PMM1,ALGG1,DPM1およびVRG4遺伝子の発現を抑制したところ,グルコース,マンノース,グリセロール,それぞれを炭素源にしたいずれの培地でも菌の増殖は見られず,試験管内では生育に必須であることが分かった.今後,マウス体内での増殖の必須性について検討する.2.昨年度までの結果から,C.glabrataにおいてはGDP-mannose pyrophosphorylaseは2つ存在し(PSA1,PSA2),PSA1は,グルコースが炭素源のときのみ,生育に対して必須で,また,PSA2の発現はグルコースによって抑制を受けることが明らかとなった。今年度は,さらに培養条件を変えて,これら2遺伝子の発現量を調べたところ,嫌気条件下の培養ではPSA1の発現は増強され,PSA2の発現は抑制されていた.このことからも,PSA1とPSA2の発現は相補的であることが示唆された.また,嫌気条件下のpsa1欠損株が宿主体内と異なり,生育できなかったことから,宿主体内の培養を考える上では,嫌気条件だけでは不十分なことが示唆された。そのため,抗真菌剤のスクリーニングに使用する培地は検討が必要であろうと考えられた.3.C.glabrataと同様GDP-mannose pyrophosphorylaseを2遺伝子(CaPSA1,CaPSA2)もつC.albicansについて,炭素源を変化させ,これら2遺伝子の発現量を調べたところ,CaPSA1はグリセロール培地ではほとんど発現せず,グルコース培地での発現が一番高かった.また,CaPSA2はグルコース培地での発現が一番低かった.このように,C.glabrataと同様なこれら2遺伝子の発現は相補的になされていることが分かった.今後変異体を用いて,CaPSA1,CaPSA2の特徴づけを行う予定である.

关于使用念珠菌和白色念珠菌1的GDP-甘露糖的合成的基因，阐明了三个点。在glabrata的C. glabrata中，位于GDP-甘露糖合成途径中的酶（PMM1：甘露糖磷光酶，ALG1：甘露糖基转移，dpm1：dololol-磷酸甘露糖合酶，Yrg4：yrg4：yrg4：gdp mannose a互惠率是在与跨跨媒介中创建的 - 与Transporer的促销者一起创建了 - 添加了DoxycyCline是四环素的衍生物，以抑制PMM1，ALGG1，DPM1和VRG4基因的表达，发现没有发现在任何含有葡萄糖，mannose，Glycerol，Glycerol，glycerol，以及每个碳来源以及在测试中的生长中，都没有发现任何细菌生长。现在，我们将研究小鼠的基本增长2。直到去年的结果表明，glabrata中有两个GDP-甘露糖焦磷酸化酶，并且只有当葡萄糖是碳源为碳源时，PSA1才至关重要，并且PSA2的表达被葡萄糖抑制。今年，我们通过改变培养条件进一步研究了这两个基因的表达水平，并发现在厌氧条件下培养中PSA1表达得到增强，PSA2表达在培养中受到抑制。这也表明PSA1和PSA2的表达是互补的。此外，由于在厌氧条件下的PSA1缺陷菌株与宿主中的菌株不能生长，因此建议仅在考虑宿主内的培养物时，仅凭厌氧条件是不够的。因此，有人认为，用于筛查抗真菌剂的培养基需要研究。3.c.Albicans，它们具有两个基因GDP-甘露糖磷酸酶（CAPSA1，CAPSA2），类似于C. bickans，与C. c. c. c. c. c. c. c. capsa and capsa and Capsa and Capsa1，capsa1，capsa2，capsa2，capsa2，capsa2，capsa2，capsa2，capsa2）对基因进行了检查。此外，CAPSA1在甘油培养基中几乎不表达，并且在葡萄糖培养基中是最高的。此外，CAPSA2在葡萄糖培养基中是最低的。在这种方式上，发现这两个基因的表达，类似于C. glabrata，是互补的。我们计划使用CAPSA1和CAPSA1和CAPSA使用Mutants的表征。