核内レセプターを介した活性化膵星細胞の抑制と膵線維化治療への応用に関する研究

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Sparmannら(Gastroenterology 112:1664,1997)の方法に従い、雌性ラット(150-180g前後)20匹に対しDibutyltin Dichlorideを12mg/kg(尾静脈より静注)投与群10匹(P群)と、コントロール群(生理食塩水投与)10匹(C群)に分けて飼育し七、膵線維化モデルを作成し、2週間後に下大静脈、門脈から滅菌的に採血するとともに、膵臓を摘出し下記の検討を行った。1.下大静脈より採取した血液から血漿を分離し、血漿アミラーゼ、リパーゼを測定したところ、P群ではC群に比べ血漿アミラーゼは増加傾向にあったが有意差は認めなかった。また血漿リパーゼは両群間で差を認めなかった。2.滅菌的に門脈血を採血し、血漿エンドトキシン、TNFαを測定した。血漿エンドトキシン値はばらつきが多く、また測定感度以下のラットもあり、両群間で差を認めなかった。血漿TNFαはP群ではC群に比べ有意に高値を示した。3.膵臓を摘出し組織学的に検討した。P群ではC群に比べ膵臓内の線維化が顕著であった。またP群では膵星細胞の活性化のマーカーであるα平滑筋アクチンの発現が増加していた。4.両群の膵臓を摘出し、膵組織をsucroseにてhomogenate後、その上清を用い過酸化脂質を測定したところ、P群ではC群に比べ有意に増加していた。また膵hydroxypmline量、膵内レチノイド含有量は現在検討中である。5.摘出した膵臓よりRNAを抽出した。現在RT-PCR法にて核内レセプターであるPPAR-γ、RAR-β、RAR-αおよびTGF-β、1型コラーゲンmRNAの発現を検討中である。6.膵臓よりDignamらの方法により核蛋白を抽出した。現在gal shift assayにて転写因子RARE、PPRE、NFκB、AP-1のbinding activityを検討中である。