核内レセプターを介した活性化膵星細胞の抑制と膵線維化治療への応用に関する研究

核受体抑制胰腺星状细胞活化的研究及其在胰腺纤维化治疗中的应用

• 批准号: 16790401
• 负责人: 橋本 健一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790401/
• 关键词: 核内レセプター; 膵線維化モデル; 膵星細胞; 転写因子; Dibutyltin Dichloride; TNFα; エンドトキシン; 過酸化脂質

Sparmannら(Gastroenterology 112:1664,1997)の方法に従い、雌性ラット(150-180g前後)20匹に対しDibutyltin Dichlorideを12mg/kg(尾静脈より静注)投与群10匹(P群)と、コントロール群(生理食塩水投与)10匹(C群)に分けて飼育し七、膵線維化モデルを作成し、2週間後に下大静脈、門脈から滅菌的に採血するとともに、膵臓を摘出し下記の検討を行った。1.下大静脈より採取した血液から血漿を分離し、血漿アミラーゼ、リパーゼを測定したところ、P群ではC群に比べ血漿アミラーゼは増加傾向にあったが有意差は認めなかった。また血漿リパーゼは両群間で差を認めなかった。2.滅菌的に門脈血を採血し、血漿エンドトキシン、TNFαを測定した。血漿エンドトキシン値はばらつきが多く、また測定感度以下のラットもあり、両群間で差を認めなかった。血漿TNFαはP群ではC群に比べ有意に高値を示した。3.膵臓を摘出し組織学的に検討した。P群ではC群に比べ膵臓内の線維化が顕著であった。またP群では膵星細胞の活性化のマーカーであるα平滑筋アクチンの発現が増加していた。4.両群の膵臓を摘出し、膵組織をsucroseにてhomogenate後、その上清を用い過酸化脂質を測定したところ、P群ではC群に比べ有意に増加していた。また膵hydroxypmline量、膵内レチノイド含有量は現在検討中である。5.摘出した膵臓よりRNAを抽出した。現在RT-PCR法にて核内レセプターであるPPAR-γ、RAR-β、RAR-αおよびTGF-β、1型コラーゲンmRNAの発現を検討中である。6.膵臓よりDignamらの方法により核蛋白を抽出した。現在gal shift assayにて転写因子RARE、PPRE、NFκB、AP-1のbinding activityを検討中である。

Sparmann (Gastroenterology 112:1664, 1997), 20 female rats (around 150 - 180 g) were given Dibutyltin Dichloride at 12 mg/kg (tail vein intravenous injection), 10 female rats (P group), 10 female rats (physiological food and water injection), 10 female rats (C group) were fed separately, 7 female rats were maintained, and 2 weeks later, sterilized blood samples were collected from inferior great vein and portal vein. 1. The lower veins were taken from the blood, and the plasma was separated. The plasma was separated from the blood. The plasma was separated from the blood. The difference between the plasma and the group is recognized. 2. Sterilization portal blood sampling, plasma and TNF α determination The plasma concentration is higher than that of the plasma concentration. Plasma TNF α is higher than that of group C. 3. The histological examination of the samples. P group The activation of astrocytes in the P group was enhanced by the development of α smooth muscle cells. 4. Group A and Group B are extracted from the supernatant and homogenized. Group C is intentionally increased. Hydroxypmline content, internal content, and current evaluation 5. RNA extraction Now RT-PCR method is used to investigate the expression of PPAR-γ, RAR-β, RAR-α and TGF-β mRNA in the nucleus. 6. The method for extracting nuclear protein from Dignam The binding activity of RARE, PPRE, NF κ B and AP-1 in gal shift assay is discussed.