ジストロフィン遺伝子のスプライシング促進配列に結合する核蛋白の研究

与肌营养不良蛋白基因剪接促进序列结合的核蛋白的研究

• 批准号: 16790575
• 负责人: 八木 麻理子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790575/
• 关键词: エクソンスキッピング; スプライシング促進配列; 核蛋白; アンチセンスオリゴヌクレオチド

私達はDuchenne型筋ジストロフィーに対する治療法として、アンチセンスオリゴヌクレオチド(AS-Oligo)を用いてスプライシング促進配列の機能を阻害することにより、エクソンスキッピングを誘導し、機能的なジストロフィン蛋白を発現させる方法を検討している。今回の研究は、ジストロフィン遺伝子のスプライシング促進配列に結合し、AS-Oligoによってその役割が阻害される核蛋白を同定し、機能を明らかにするものである。私達は、現在までに、ジストロフィン遺伝子を構成する9つのエクソン(エクソン19、41、44、45、46、50、51、53、55)についてスキッピングを誘導できるAS-Oligoを確立している。今年度は今まで確立したAS-Oligoうち、エクソン44あるいはエクソン45のスキッピングの誘導するAS-Oligoについて、インフォームドコンセントを得て採取したDMD患者由来の皮膚培養細胞にMyoD遺伝子を組み込んだウイルスベクターを導入し形質転換を誘導した筋細胞を用いてジストロフィン蛋白の発現を回復させるかどうかについて検討した。AS-Oligoとしては昨年度と同様に、RNAとの結合能が強く、ヌクレアーゼに耐性な、2'-O,4'-C-ethylene-bridged nucleic acid(ENA)を含むRNA/ENAキメラを用いた。エクソン44欠失細胞にはエクソン45のスキッピング誘導するRNA/ENAキメラを、エクソン45欠失細胞にはエクソン44のスキッピングを誘導するRNA/ENAキメラをそれぞれ導入した結果、mRNAでは、80〜100%で標的とするエクソンのスキッピングが誘導されていた。さらに免疫組織染色およびウエスタンブロット法によりストロフィン蛋白が発現することを確認した。

Private da は Duchenne type steel ジ ス ト ロ フ ィ ー に す seaborne る therapy と し て, ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド (AS - Oligo) を い て ス プ ラ イ シ ン グ promote function of match column の を resistance against す る こ と に よ り, エ ク ソ ン ス キ ッ ピ ン グ を induced し, functional な ジ ス ト ロ フ ィ ン protein を 発 now さ せ る party France を検 claims て て る る. Today back の research は, ジ ス ト ロ フ ィ ン heritage 伝 son の ス プ ラ イ シ ン グ promote match column に し, the AS - Oligo に よ っ て そ の service cut が resistance against さ れ る nucleoprotein を with し, functional を Ming ら か に す る も の で あ る. Private は, now ま で に, ジ ス ト ロ フ ィ ン posthumous son 伝 を constitute す る 9 つ の エ ク ソ ン (エ ク ソ ン 19, 41, 44, 45, 46, 50, 51, 53, 55) に つ い て ス キ ッ ピ ン グ を induced で き る AS - Oligo を establish し て い る. Our は today ま で establish し た AS - Oligo う ち, エ ク ソ ン 44 あ る い は エ ク ソ ン 45 の ス キ ッ ピ ン グ の induced す る AS - Oligo に つ い て, イ ン フ ォ ー ム ド コ ン セ ン ト を have て take し た DMD patients origin の skin cells に MyoD heritage 伝 son を group み 込 ん だ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を guide Induced into し form quality planning in を し た muscle cells を using い て ジ ス ト ロ フ ィ ン protein の 発 reply now を さ せ る か ど う か に つ い て beg し 検 た. The AS - Oligo と し て は yesterday with others in the annual と に, RNA と の binding energy が く, ヌ ク レ ア ー ゼ に patience な, 2 '- O, 4' - C - ethylene - bridged nucleic acid (ENA) を containing む RNA/ENA キ メ ラ を with い た. エ ク ソ ン 44 owe cell loss に は エ ク ソ ン 45 の ス キ ッ ピ ン グ induced す る RNA/ENA キ メ ラ を, エ ク ソ ン 45 owe cell loss に は エ ク ソ ン 44 の ス キ ッ ピ ン グ を induced す る RNA/ENA キ メ ラ を そ れ ぞ れ import し た results, mRNA で は, 80 ~ 100% で mark と す る エ ク ソ ン の ス キ Youdaoplaceholder0 されて グが induces されて た た. さ ら に immunohistochemical staining お よ び ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に よ り ス ト ロ フ ィ ン protein が 発 now す る こ と を confirm し た.

项目成果

Chimeric RNA/ethylene-bridged nucleic acids promote dystrophin expression in myocytes of duchenne muscular dystrophy by inducing skipping of the nonsens

嵌合RNA/乙烯桥核酸通过诱导无意义的跳跃来促进杜氏肌营养不良症肌细胞中肌营养不良蛋白的表达

• 发表时间: 2004
• 期刊: Human Gene Therapy Vol.15 No.8
• 作者: 松崎彰信;住江愛子;Kambe N et al.;Paraguison R.C.;Lin H et al.;Yamamoto T et al.;Takeshima Y.;Thi Tran HT.;Yagi M.;Surono A.
• 通讯作者: Surono A.

Chimeric RNA and 2'-O, 4'-C-ethylene-bridged nucleic acids have stronger activity than phosphorothioate oligodeoxynucleotides in induction of exon 19 sk

嵌合RNA和2-O、4-C-亚乙基桥核酸在诱导外显子19 sk方面比硫代磷酸寡脱氧核苷酸具有更强的活性

• 发表时间: 2004
• 期刊: Oligonucleotides Vol.14 No.1
• 作者: 松崎彰信;住江愛子;Kambe N et al.;Paraguison R.C.;Lin H et al.;Yamamoto T et al.;Takeshima Y.;Thi Tran HT.;Yagi M.
• 通讯作者: Yagi M.

A G-to-A transition at the fifth position of intron-32 of the dystrophin gene inactivates a splice-donor site both in vivo and in vitro

• DOI: 10.1016/j.ymgme.2005.03.006
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: MOLECULAR GENETICS AND METABOLISM
• 影响因子: 3.8
• 作者: Tran, HTT;Takeshima, Y;Matsuo, M
• 通讯作者: Matsuo, M

ジストロフィン転写産物のエクソンスキッピング誘導療法(解説/特集)

肌营养不良蛋白转录本的外显子跳跃诱导治疗（评论/专题）

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular Medicine 41巻3号
• 作者: Yasuoka H;et al.;八木 麻理子
• 通讯作者: 八木 麻理子

Intraperitoneal administration of phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotide against splicing enhancer sequence induced exon skipping in dystrophin mRNA expressed in mdx skeletal muscle

• DOI: 10.1016/j.braindev.2004.12.006
• 发表时间: 2005-10
• 期刊: Brain and Development
• 影响因子: 1.7
• 作者: Y. Takeshima;M. Yagi;H. Wada;M. Matsuo