ジストロフィンmRNA前駆体のスプライシング促進配列に結合する核タンパクに関する研究

抗肌营养不良蛋白前体mRNA剪接促进序列结合核蛋白的研究

• 批准号: 02F00252
• 负责人: 松尾 雅文
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00252/
• 关键词: DMD; dystrophin; splicing; RNA binding protein

ジストロフィン遺伝子から転写されたmRNA前駆体は100kb以上もの巨大イントロンを有しており、そのスプライシングは非常に精密に制御されているものと考えられる。しかし、その機構を分子細胞生物学的手法を用いて明らかにした報告はない。本研究は、ジストロフィンmRNA前駆体に結合する核タンパクを分離精製し、その遺伝子をクローニングするとともに、発現させたタンパクを用いてスプライシング制御機序を明らかにするものである。ジストロフィン遺伝子の79のエクソンの中でエクソン19にスプライシング促進配列があることが明らかにされている。本研究では、まずエクソン19のスプライシング促進配列に結合する核タンパクの分離精製を行った。31塩基からなるエクソン19のスプラシシング促進配列からなるFAMラベルしたRNAプローブを作製した。これをHeLa細胞核抽出液と混ぜRNA・タンパク複合体をUVクロスリンク法を用いて作製した。さらに、HPLC法と電気泳動法を用いてこの複合体を単一バンドになるまで精製した。そして、この精製したバンドをTOFMAS分析し、プローブに結合した核タンパクの一部のアミノ酸配列を直接明らかにし、その結果からスプライシング促進配列に結合するタンパクの同定に成功した。この分離精製したタンパクのcDNAの全長をスクリーニングし、これをタンパク発現ベクターに組み込んだ。現在、本タンパク質の機能解析をミニ遺伝子を導入したHeLa細胞を応用した分子生物学的手法を用いて行っている。

ジ ス ト ロ フ ィ ン posthumous son 伝 か ら planning write さ れ た mRNA 駆 body before more than 100 KB は も の huge イ ン ト ロ ン を have し て お り, そ の ス プ ラ イ シ ン グ は very に precision に suppression さ れ て い る も の と exam え ら れ る. The を, そ, そ institutions, を, molecular and cellular biology techniques, を, て, て, ら, に, た report, な, な, な. は, this study ジ ス ト ロ フ ィ ン mRNA 駆 body before に combining す る nuclear タ ン パ ク を separation of refined し, そ の posthumous son 伝 を ク ロ ー ニ ン グ す る と と も に, 発 さ せ た タ ン パ ク を with い て ス プ ラ イ シ ン グ suppression machine sequence を Ming ら か に す る も の で あ る. ジ ス ト ロ フ ィ ン posthumous son 伝 の 79 の エ ク ソ ン の in で エ ク ソ ン 19 に ス プ ラ イ シ ン グ promote match column が あ る こ と が Ming ら か に さ れ て い る. This study で は, ま ず エ ク ソ ン 19 の ス プ ラ イ シ ン グ promote match column に combining す る nuclear タ ン パ ク の line separating refined を っ た. 31 salt base か ら な る エ ク ソ ン 19 の ス プ ラ シ シ ン グ promote match column か ら な る FAM ラ ベ ル し た RNA プ ロ ー ブ を cropping し た. こ れ を HeLa cell nucleus extract と mixed ぜ RNA, タ ン パ ク complex を UV ク ロ ス リ ン を ク method with い て cropping し た. Youdaoplaceholder0, HPLC method と, electrokinetic method を, and the process of refining た with the を単 て <e:1> <s:1> complex を単 - バ バ ドになるまで ドになるまで. そ し て, こ の refined し た バ ン ド を TOFMAS analysis し, プ ロ ー ブ に combining し た nuclear タ ン パ ク の a の ア ミ ノ acid with column を directly Ming ら か に し, そ の results か ら ス プ ラ イ シ ン グ promote match column に combining す る タ ン パ ク の with fixed に successful し た. こ の separation of refined し た タ ン パ ク の cDNA の span を ス ク リ ー ニ ン グ し, こ れ を タ ン パ ク 発 now ベ ク タ ー に group み 込 ん だ. Now, this タ ン パ ク qualitative analytical を の function ミ ニ heritage 伝 son を import し た HeLa を 応 with し た molecular biology technique を with い て line っ て い る.

项目成果

Yagi Mariko: "Chimeric RNA and 2'-O, 4'-C-ethylene-bridged nucleic acids have stronger activity than phosphorothioate oligodeoxynucleotides in induction of exon-19 skipping in dystrophin mRNA."Oligonucleotides. 5(in press). (2003)

Yagi Mariko：“嵌合 RNA 和 2-O、4-C-亚乙基桥核酸在诱导肌营养不良蛋白 mRNA 中的外显子 19 跳跃方面比硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸具有更强的活性。”寡核苷酸。