抗肌营养不良蛋白前体mRNA剪接促进序列结合核蛋白的研究-猫眼课题宝

抗肌营养不良蛋白前体mRNA剪接促进序列结合核蛋白的研究

批准号：

02F00252

负责人：

松尾雅文

金额：

$1.34万

依托单位：

Kobe University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

财政年份：

2002

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

2002 至 2003

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00252/

关键词：

DMD dystrophin splicing RNA binding protein

项目摘要

项目成果

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中文摘要

翻译

ジストロフィン遺伝子から転写されたmRNA前駆体は100kb以上もの巨大イントロンを有しており、そのスプライシングは非常に精密に制御されているものと考えられる。しかし、その機構を分子細胞生物学的手法を用いて明らかにした報告はない。本研究は、ジストロフィンmRNA前駆体に結合する核タンパクを分離精製し、その遺伝子をクローニングするとともに、発現させたタンパクを用いてスプライシング制御機序を明らかにするものである。ジストロフィン遺伝子の79のエクソンの中でエクソン19にスプライシング促進配列があることが明らかにされている。本研究では、まずエクソン19のスプライシング促進配列に結合する核タンパクの分離精製を行った。31塩基からなるエクソン19のスプラシシング促進配列からなるFAMラベルしたRNAプローブを作製した。これをHeLa細胞核抽出液と混ぜRNA・タンパク複合体をUVクロスリンク法を用いて作製した。さらに、HPLC法と電気泳動法を用いてこの複合体を単一バンドになるまで精製した。そして、この精製したバンドをTOFMAS分析し、プローブに結合した核タンパクの一部のアミノ酸配列を直接明らかにし、その結果からスプライシング促進配列に結合するタンパクの同定に成功した。この分離精製したタンパクのcDNAの全長をスクリーニングし、これをタンパク発現ベクターに組み込んだ。現在、本タンパク質の機能解析をミニ遺伝子を導入したHeLa細胞を応用した分子生物学的手法を用いて行っている。

英文摘要

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会议论文

Yagi Mariko: "Chimeric RNA and 2'-O, 4'-C-ethylene-bridged nucleic acids have stronger activity than phosphorothioate oligodeoxynucleotides in induction of exon-19 skipping in dystrophin mRNA."Oligonucleotides. 5(in press). (2003)

Yagi Mariko：“嵌合 RNA 和 2-O、4-C-亚乙基桥核酸在诱导肌营养不良蛋白 mRNA 中的外显子 19 跳跃方面比硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸具有更强的活性。”寡核苷酸。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

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