全身性強皮症における線維化関連遺伝子のDNAマイクロアレイを用いた検討

利用 DNA 微阵列研究系统性硬皮病纤维化相关基因

• 批准号: 16790628
• 负责人: 白崎 文朗
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790628/
• 关键词: 線維化; TGF-β; CTGF; ケモカイン; コラーゲン

前年度に引き続き、TGFβとCTGFで誘導される線維化へのサイトカイン、ケモカインおよびその受容体の関与を検討するため、培養ヒト線維芽細胞にTGFβあるいはTGFβとCTGFを添加し、4時間後と24時間後の遺伝子変化をDNAマイクロアレイ法で比較検討した。DNAマイクロアレイ法は各遺伝子において少なくとも2つ以上のプローブを用いて検討し、その結果はTGFβ単独投与群とTGFβとCTGF投与群を比較して3倍以上の増減を有意と判定した。24時間後の時点ではIL-4が6.5倍、FGF-1が4.2倍、CCL17が7.7倍、CX3CR1が3.0倍の増加を認め、逆にCXCR11は0.16倍、CCL5は0.18倍に減少した。これらの遺伝子は4時間後には有意な変動を認めなかった。また、TNF-α、HGF、IGF、VEGF、PDGF、EGFは4時間後も24時間も有意な増減はみられなかった。次に、DNAマイクロアレイ法の結果を確認するため、24時間後のIL-4、CCL17、CX3CR1 mRNA発現量をノーザンブロット法で検討したところ、TGFβとCTGF投与群がTGFβ単独投与群に比べいずれの遺伝子も2倍程度の有意な増加を認めた。そこで、変化のみられたCX3CR1(fractalkineの受容体)に着目し、in vivoでの線維化抑制実験を試みた。すなわち、CX3CR1欠損マウスにTGFβを3日間、続けてCTGFを4日間皮下投与することにより線維化誘導実験を行った。その結果、CX3CR1欠損マウス8日目の組織中のコラーゲン量は、野生型マウスと比較して減少傾向がみられた。また、8日目の組織中マクロファージ数を検討したところ、CX3CR1欠損マウスにおいて有意な減少を認めた。この結果より、CTGFによる線維化の維持にCX3CR1が関与している可能性があると結論づけた。

Before annual に lead き 続 き, TGF beta と CTGF で induced さ れ る line dimensions へ の サ イ ト カ イ ン, ケ モ カ イ ン お よ び そ の by let body の masato and を beg す 検 る た め, cultivating ヒ ト line d bud cells に TGF beta あ る い は TGF beta と CTGF を add し, 4 と 24 time after time の heritage 伝 sub - the を DNA マ イ ク ロ ア レ イ method Youdaoplaceholder0 compares 検 for た. Method of DNA マ イ ク ロ ア レ イ は each legacy 伝 son に お い て less な く と も above 2 つ の プ ロ ー ブ を with い て beg し 検, そ の results は TGF beta 単 alone the cast and the group of と TGF beta と CTGF vote compared with group of を し 3 times て の rights reduce を intentionally と determine し た. After 24 time の point で は IL - 4 が が 4.2 times, 6.5 times, FGF - 1 CCL17 が 7.7 times, CX3CR1 が の raised 3.0 times plus を recognize め, inverse に CXCR11 は 0.16 times, CCL5 は 0.18 times に reduce し た. The った れら cultural heritage 伝 child 伝 4 years later に intentionally な changes を recognition めな な った った. Youdaoplaceholder0, TNF-α, HGF, IGF, VEGF, PDGF, EGF また 4 times followed by 24 times また intentionally increases or decreases な みられな った った. The results of the に, DNA ロアレ するため ロアレ ロアレ ロアレ ロアレ を confirm するため, 24 hours later, <s:1> IL-4, CCL17, CX3CR1 Amount of mRNA 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method で beg し 検 た と こ ろ, TGF beta と cast with group of CTGF が TGF beta 単 cast with group of に alone than べ い ず れ の heritage 伝 son も double degree の intentionally な raised plus を recognize め た. そ こ で, - の み ら れ た CX3CR1 (fractalkine の let body) に mesh し, the in vivo で の line dimensions inhibit be 験 を try み た. す な わ ち, CX3CR1 owe damage マ ウ ス に TGF beta を 3 day, 続 け て CTGF を 4 day cast with subcutaneous す る こ と に よ り line dimensions induced be 験 を line っ た. そ の results, CX3CR1 owe damage マ ウ ス の in 8 eyes の organization コ ラ ー ゲ ン は, wild type マ ウ ス と compare し て decrease tendency が み ら れ た. ま た, 8 eyes の organization マ ク ロ フ ァ ー ジ number を beg し 検 た と こ ろ, CX3CR1 owe damage マ ウ ス に お い て intentionally な reduce を recognize め た. The <s:1> <s:1> results よ による, the CTGFによる line dimensionalization <s:1> maintains the にCX3CR1が relationship and the <s:1> て る る る る possibility があると conclusion づけた.

项目成果

皮膚線維化発症機序とモデルマウス

皮肤纤维化发生机制及小鼠模型

• 发表时间: 2004
• 期刊: 医学のあゆみ 211(11)
• 作者: Chujo S;Shirasaki F et al.;白崎文朗
• 通讯作者: 白崎文朗

Connective tissue growth factor causes persistent proalpha2(I) collagen gene expression induced by transforming growth factor-beta in a mouse fibrosis model.

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of cellular physiology
• 影响因子: 5.6
• 作者: Sonoko Chujo;F. Shirasaki;S. Kawara;Y. Inagaki;Takuro Kinbara;M. Inaoki;M. Takigawa;K. Takehara

皮膚線維化の機序とモデルマウス

皮肤纤维化机制及小鼠模型

• 发表时间: 2006
• 期刊: 皮膚の科学 5巻Suppl.6
• 作者: 中條園子;伊川友香;白崎文朗;竹原和彦
• 通讯作者: 竹原和彦