RNA干渉を利用した常染色体優性遺伝性皮膚疾患に対する遺伝子治療

利用 RNA 干扰进行常染色体显性皮肤病的基因治疗

• 批准号: 16790667
• 负责人: 堺 則康
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790667/
• 关键词: SiRNA; Ehlers-Danlos症候群IV型; III型コラーゲン; 常染色体優性遺伝; 遺伝子治療

本研究は、常染色体優性遺伝を呈する遺伝性皮膚疾患に対する遺伝子治療の研究であり、RNAiを利用したmRNAレベルで遺伝子の発現抑制による遺伝子治療が技術的に可能かどうかを検討している。具体的には、異常なIII型コラーゲンを発現する常染色体優性疾患であるEhlers-Danlos症候群IV型患者から樹立した線維芽細胞を用いて、遺伝子変異部分を特異的に認識するsiRNAを作成し、異常蛋白を発現する遺伝子のmRNAレベルでの抑制能を検証している。方法:「siRNAのヒト線維芽細胞への導入実験」実験には、Ehlers-Danlos症候群IV型患者から樹立したヒト線維芽細胞を用いている。これらの細胞は、既に変異部位が同定(全てIII型コラーゲン遺伝子の点変異)されているものである。変異部位を含んだ配列を標的として、siRNAを数種類設計する。理論的には、20種類前後のsiRNAが設計可能だが、順次設計し、それぞれについてsiRNAの細胞へのTransfection実験を行い、III型コラーゲン遺伝子のmRNA発現量をNorthern hybridization, RT-PCRにより測定し、その中で発現の効率抑制が最も高いと思われるsiRNAを最終的に選択する。対照として、正常人から採取したヒト線維芽細胞を用いて、III型コラーゲン遺伝子の抑制度合いを確認する。siRNAの持つ高い特異性から、正常のコラーゲン遺伝子のmRNA発現は抑制されないと推測される。現在、この細胞導入モデルを作成、順次検討中である。結論を出すには至っていないが、さらに実験を重ね、検討を続けている。

This study is aimed at exploring the potential of gene therapy for inherited skin disorders by using autosomal dominant gene expression and RNAi to inhibit gene expression. Specific autosomal dominant disorders such as Ehlers-Danlos syndrome type IV, abnormal type III protein expression, and specific recognition of cellular and genetic variants, siRNA production, abnormal protein expression, and mRNA expression, and inhibition of gene expression are identified. Methods: "Introduction of siRNA into line cells" was carried out in patients with Ehlers-Danlos syndrome type IV. The cells of this type are identical in different parts (all types III). Different parts of the genome are designed to contain different siRNAs. The theoretical basis is that 20 kinds of siRNA may be designed, sequentially designed, and finally selected for the detection of mRNA expression of type III siRNA gene by Northern hybridization, RT-PCR, and the detection efficiency inhibition rate. To confirm the inhibition of type III DNA in normal individuals siRNA maintains high specificity and normal mRNA expression but inhibits mRNA expression. Now, the introduction of cells into the preparation, in order to discuss The conclusion is that there is no need to change the situation.