课题基金 / 基金详情

新しい甲状腺刺激ホルモンα2β5(サイロスティムリン)のELISA開発と糖鎖解析

新しい甲状腺刺激ホルモンα2β5(サイロスティムリン)のELISA開発と糖鎖解析
新型促甲状腺激素α2β5(促甲状腺素)的 ELISA 开发和聚糖分析
批准号:
16790953
负责人:
中林 幸士
金额:
$2.24万
依托单位:
依托单位国家:
日本
项目类别:
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份:
2004
资助国家:
日本
项目状态:
已结题
起止时间:
2004 至 2005

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
LH, FSH, TSHのαサブユニットとβサブユニットに類似した新しい2つの糖タンパクである第2のαサブユニット(α2)と第5のサブユニット(β5)をヒト下垂体cDNAライブラリーより発見した。α2とβ5は互いにヘテロダイマーを形成してTSH受容体を刺激することを認め、この新しい糖タンパクホルモンをサイロスティムリンと命名した(J Clin Invest 109:1445-52,2002)。本研究では、α2及びβ5に対する抗体作成及び糖鎖・シスチンノットのダイマー形成能や分泌能に及ぼす影響を検討するのが目的である。まず、抗体作成のために、α2及びβ5に対する精製したGST-fusion proteinを作成した。PGEX 4T1ベクターにα2及びβ5を組み込み、ベクターをBL21に形質導入した。形質導入した細胞にIPTGを添加することで蛋白を発現させ、細胞内よりソニケーターで抽出した。抽出した蛋白をGSTカラムにかけ精製した。抗原として必要な約10mgの精製した蛋白を作成した。α2及びβ5をウサギに免疫したが、抗体価の高いバッチを選択し、immunoblottingしたが、良質な抗体は得られなかった。次に、糖鎖・シスチンノットのダイマー形成能や分泌能に及ぼす影響を検討するため、α2及びβ5の変異体を作成した。オーバーラッピングPCRを用い、糖鎖結合部位のアスパラギン及びシスチンノットを形成するシステインをアラニンへ変異させ糖鎖を切断したα2 cDNAとβ5 cDNA、シスチンノットを切断したα2 cDNAとβ5 cDNAを作成し、変異をシークエンスにより確認した。続いて、変異を入れたα2 cDNAとβ5 cDNAを293t細胞に形質導入し、cell lineを作成した。
英文摘要
LH, FSH, TSHのαサブユニットとβサブユニットに類似した新しい2つの糖タンパクである第2のαサブユニット(α2)と第5のサブユニット(β5)をヒト下垂体cDNAライブラリーより発見した。α2とβ5は互いにヘテロダイマーを形成してTSH受容体を刺激することを認め、この新しい糖タンパクホルモンをサイロスティムリンと命名した(J Clin Invest 109:1445-52,2002)。本研究では、α2及びβ5に対する抗体作成及び糖鎖・シスチンノットのダイマー形成能や分泌能に及ぼす影響を検討するのが目的である。まず、抗体作成のために、α2及びβ5に対する精製したGST-fusion proteinを作成した。PGEX 4T1ベクターにα2及びβ5を組み込み、ベクターをBL21に形質導入した。形質導入した細胞にIPTGを添加することで蛋白を発現させ、細胞内よりソニケーターで抽出した。抽出した蛋白をGSTカラムにかけ精製した。抗原として必要な約10mgの精製した蛋白を作成した。α2及びβ5をウサギに免疫したが、抗体価の高いバッチを選択し、immunoblottingしたが、良質な抗体は得られなかった。次に、糖鎖・シスチンノットのダイマー形成能や分泌能に及ぼす影響を検討するため、α2及びβ5の変異体を作成した。オーバーラッピングPCRを用い、糖鎖結合部位のアスパラギン及びシスチンノットを形成するシステインをアラニンへ変異させ糖鎖を切断したα2 cDNAとβ5 cDNA、シスチンノットを切断したα2 cDNAとβ5 cDNAを作成し、変異をシークエンスにより確認した。続いて、変異を入れたα2 cDNAとβ5 cDNAを293t細胞に形質導入し、cell lineを作成した。
期刊论文(3)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
サイロスティムリン
赛罗斯蒂林
DOI: --
发表时间: 2005
期刊: 日本臨床 63
影响因子: --
作者: [Ishida Maho, Arita Jun, Hamada AL., 中林 幸士]
通讯作者: 中林 幸士
Transfection of antisense chorionic gonadotropin beta gene into choriocarcinoma cells suppresses the cell proliferation and induces apoptosis.
将反义绒毛膜促性腺激素β基因转染至绒毛膜癌细胞中可抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。
DOI: --
发表时间: 2005
期刊: J Clin Endocrinol Metab 90
影响因子: --
作者: [Ishida Maho, Arita Jun, Hamada AL.]
通讯作者: Hamada AL.
CRHとストレス誘導性関連ペプチドの妊娠初期絨毛外トロホブラスト浸潤能への関与
  • 批准号:
    18791154
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 资助金额:
    $2.24万
  • 财政年份:
    2006
  • 负责人:
    中林 幸士
  • 依托单位:
国内基金
海外基金
SIRT4介导的ATP5β乙酰化修饰在血管平滑肌细胞衰老和腹主动脉瘤中的作用和机制研究
  • 批准号:
    2026JJ50331
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    --
  • 批准年份:
    2026
  • 负责人:
    袁昭顺
  • 依托单位:
外泌体递送Let-7c-5p介导运动抗动脉粥样硬化的机制研究
  • 批准号:
    2026JJ50436
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    --
  • 批准年份:
    2026
  • 负责人:
    常早上
  • 依托单位:
ALKBH5 SUMO化-YTHDF2介导FBXW7 m6A修饰在宫腔粘连诱发子宫内膜细胞端粒损伤和细胞衰老的机制研究
  • 批准号:
    2026JJ50624
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    --
  • 批准年份:
    2026
  • 负责人:
    冯晴
  • 依托单位:
肿瘤电场治疗通过抑制Ccl5+巨噬细胞重塑胶质母细胞瘤免疫微环境的机制研究
  • 批准号:
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    --
  • 批准年份:
    2026
  • 负责人:
    文杰
  • 依托单位: