权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

新しい甲状腺刺激ホルモンα2β5(サイロスティムリン)のELISA開発と糖鎖解析

新型促甲状腺激素α2β5（促甲状腺素）的 ELISA 开发和聚糖分析

基本信息

批准号：
16790953
负责人：
中林幸士
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790953/
关键词：
α2 β5 サイロスティムリン

项目摘要

LH, FSH, TSHのαサブユニットとβサブユニットに類似した新しい2つの糖タンパクである第2のαサブユニット(α2)と第5のサブユニット(β5)をヒト下垂体cDNAライブラリーより発見した。α2とβ5は互いにヘテロダイマーを形成してTSH受容体を刺激することを認め、この新しい糖タンパクホルモンをサイロスティムリンと命名した(J Clin Invest 109:1445-52,2002)。本研究では、α2及びβ5に対する抗体作成及び糖鎖・シスチンノットのダイマー形成能や分泌能に及ぼす影響を検討するのが目的である。まず、抗体作成のために、α2及びβ5に対する精製したGST-fusion proteinを作成した。PGEX 4T1ベクターにα2及びβ5を組み込み、ベクターをBL21に形質導入した。形質導入した細胞にIPTGを添加することで蛋白を発現させ、細胞内よりソニケーターで抽出した。抽出した蛋白をGSTカラムにかけ精製した。抗原として必要な約10mgの精製した蛋白を作成した。α2及びβ5をウサギに免疫したが、抗体価の高いバッチを選択し、immunoblottingしたが、良質な抗体は得られなかった。次に、糖鎖・シスチンノットのダイマー形成能や分泌能に及ぼす影響を検討するため、α2及びβ5の変異体を作成した。オーバーラッピングPCRを用い、糖鎖結合部位のアスパラギン及びシスチンノットを形成するシステインをアラニンへ変異させ糖鎖を切断したα2 cDNAとβ5 cDNA、シスチンノットを切断したα2 cDNAとβ5 cDNAを作成し、変異をシークエンスにより確認した。続いて、変異を入れたα2 cDNAとβ5 cDNAを293t細胞に形質導入し、cell lineを作成した。

LH, FSH, TSH αα2 and β5 are mutually related and form a TSH receptor that is stimulated by a new molecule (J Clin Invest 109:1445- 52, 2002). The aim of this study is to investigate the effects of α2 and β5 on the formation and secretion of antibodies. The production of GST-fusion proteins PGEX 4T1 sets α2 and β5 together, sets BL21 together. IPTG is introduced into the cell, and protein is produced and extracted from the cell. Extract GST from the protein and refine it. About 10mg of purified protein is required.α2 and β5 are the most important factors in the immune system. The formation and secretion of protein and protein are discussed in detail in this paper. In addition, the gene expression of α2 cDNA and β5 cDNA was detected by PCR. The gene expression of α2 cDNA and β5 cDNA was detected by PCR. The expression of α2 cDNA and β5 cDNA in 293t cells was studied.